метод бактериологични изследвания (BLMI) - метод, основан на изолиране на чисти култури от бактерии чрез култивиране в хранителна среда и идентификация на вида на базата на изследването на морфологични, културни, биохимични, генетични, серум, биологични, характеристики микроорганизми околната среда.
Бактериологични диагностика на инфекция се извършва с помощта на стандартния диагностичен схема, одобрена от Министерството на здравеопазването.
Чиста култура - един вид бактерии отглеждат в хранителна среда, свойствата на които са в процес на обучение.
Щам - идентифицирани чиста култура на един вид микроорганизми, изолирани от даден източник на определено време. Щамове от един вид могат да бъдат малко по-различен биохимични, генетични, серологични, биологични и други. Имоти, както и разпределението на място и време.
1. резюме на диагнозата на етиологичен: изолиране на чиста култура от микроорганизми и идентифицирането му.
2. Идентифициране на допълнителни свойства, например, чувствителност на микроорганизма към антибиотика и бактериофага.
3. Определяне на броя на микроорганизмите (важни при диагностицирането на инфекции, причинени IMOD).
4. набор от микроорганизми, т.е.. Д. Определяне вътревидови различия въз основа на проучване на генетично и епидемиологично (fagovarov серотипа и) маркери. Той се използва за епидемиологични цели, т.е.. А. Тя позволява да се създаде общност от микроорганизми, разпределени от различни пациенти и от различни екологични обекти в различни болници, географски региони.
BLMI включва няколко стъпки, различен за аероби, факултативни анаероби и задължават анаеробни бактерии.
I. Етапи BLMI разпределението на чиста култура на аеробни и анаеробни бактерии факултативни.
A.Zabor, транспортиране, съхранение, предварително третиране материал. Понякога преди засяването се извършва селективно със свойствата материал за обработка на излъчваната микроорганизъм. Например, преди изследване на храчка или друг материал kislotustoychivyh присъствието на Mycobacterium туберкулоза, материалът се третира с разтвори на киселини или основи.
Б. засяване в обогатена среда (ако е необходимо) .Ego извършва ако в материала, съдържаща малко количество бактерии, например, в кръвния разпределение култура. За тази кръв, взета в разгара на треската в голям обем (8-10 мл за възрастни, 4-5 мл за деца) са засети в сряда в 01:10 часа (за преодоляване на бактерицидното действие на кръвоносните фактори); засяване се инкубира при 37 0 ° С в продължение на 18-24 часа.
Б. микроскопия тестов материал. На изпитваното съединение се получава намазка, петна го от Грам или друг метод, и mikroskopiruyut. Оценка на настоящото микрофлора, неговото количество. В допълнителни изследвания трябва да бъдат изолирани микроорганизми в първичния намазка.
Засяването на хранителна среда, за да се получат изолирани колонии. Инокулираните материал линия или шпатула чрез механично дисоциация с чаша диференциална диагностика или селективна среда, за да се получат изолирани колонии. След засяването perevora чаша Chiva отдолу нагоре (за да се избегне размазване колонии капчици течност кондензиране) знак, и се поставя в инкубатор при 37 0 ° С в продължение на 18-24 часа.
Трябва да се помни, че когато реколтата и презасаждане микробните култури внимание следва да се обърне на работата по асептично да се предотврати замърсяване на хранителната среда и предотвратяване на инфекция на другите и себе инфекция!
В случай на инфекции, причинени от опортюнистични микроорганизми, който брои броя на микроорганизмите, присъстващи в патологичен материал, количествен задачи посяване материал, който предварително получава серия от 100-кратно разреждане на материала (обикновено 3 разреждания) в стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид в епруветките. След 50 мкл от всяко разреждане се поставят върху хранителна среда в петриеви панички.
Едно проучване на морфологични типа колонии на медиите, тяхната микроскопия. Зрителите чаша и се отбележи, оптимална хранителна среда, скорост на растеж, естеството на растежа на микроорганизми. За да се изучи vybirayutizolirovannye колонии, разположени по протежение на допир, по-близо до центъра. Ако растат няколко вида колонии - всеки изследван отделно. Оценка подписва колонии (таблица. 7). Ако необходимите posevamiprosmatrivayut чаши с лупа или микроскоп с варио обектив малки и стеснен отвор. Научете багрилни свойства различни morphotypes колонии за тази част от изследването на колония подготви намазка, Грам-оцветяване или други методи, и се определя морфология mikroskopiruyut чистота kultury.Pri необходимо Дай показателно за RA върху стъкло с поливалентна серуми.
Б. Натрупването на нетната култура. За натрупване в чиста култура morphotypes всички изолирани колонии се субкултивират в отделни тръби с скосен агар или друга растежна среда и се инкубират в инкубатор при 37 0 С (тази температура е оптимално за повечето микроорганизми, но могат да бъдат различни, например, Campylobacterium SPP . - 42 0 С, Candida SPP и Yersinia Pestis -. 25 0 ° С).
Като среда за съхранение на ентеробактериите обикновено се използва Kligler среда.
Средата състав Kligler: IPA, 0.1% глюкоза, 1% лактоза реагент на сероводород (железен сулфат + + натриев тиосулфат, натриев сулфит), фенол червено индикатор. Оригиналния цвят на среда малина червено, сряда "скосени" в епруветки: колона (2/3) и скосени повърхност (1.3).
Сеитбата сряда Kligler произведени ивици по повърхността и убождане в колона.
А. счетоводен носител растеж, оценка култура чистота в намазка върху модел на растеж Gramu.Otmechayut избран чиста култура. Визуално чиста култура се характеризира с единна растеж. Микроскопско изследване на оцветени петна, получени от култура в него в различни области изглед Detect-жив и багрилни морфологично еднородни клетки. Въпреки това, в случай на изразена pleomorphism бактерии присъщ Neko torym тип в намазки от чисти култури може да се случи едновременно с различен клетъчната морфология.
Ако средата за съхранение използва Kligler индикатор среда, той променя цвета си оценена в колоната, и скосената част, които определят биохимични свойства: ферментация на глюкоза, лактоза и сероводород производство. Когато разлагането на лактоза жълт наклонена част от околната среда, от разлагането на глюкозата - жълтата лента. Когато образуването на СО 2 по време на разлагането на захари образуват газови мехурчета или прекъсване колона. В случая на производство на сероводород потъмняване наблюдава по време на инжектирането поради превръщането на железен сулфат в железен сулфид.
Символи Kligler промени (фиг. 23) се обяснява с неравни среда цветови интензитет разделяне микроорганизми азотни вещества и образуването на алкални продукти при аеробни (на скосената повърхност) и анаеробно (в барове) условия.
При аеробни условия, при скосен повърхността се schelocheobrazovanie по-интензивно, отколкото в графата на средата. Следователно, когато разграждането на настоящото глюкоза в средата, в малки количества, която се образува на повърхността скосена бързо неутрализира киселина. В същото време в разграждането на лактозата присъства в среда с висока концентрация, алкални продукти, които не са в състояние да неутрализира киселината.
При анаеробни условия в продуктите на колона алкални са оформени в много малки количества, така че се открива ферментация на глюкоза.
Фиг. 23. Индикатор сряда Kligler:
2 - с растежа на Е. коли,
3- с увеличаване на S. paratyphi В,
растеж С4 S. Typhi
E.coli, се разлагат глюкоза и лактоза с образуване на газ, не произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната и скосената част на несъответствието инча
S. paratyphi разлагат глюкоза от газове, laktozootritsatelny. Те причиняват пожълтяване на колоната със сълзи, скосена част не променя цвета си и да останат пурпурно. Така S. paratyphi B продукция сероводород (по време на инжектирането изглежда черен оцветяване), S. paratyphi A не произвеждат сероводород.
S. Typhi разлагат глюкоза без производството на газ, laktozootritsatelny, произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната, без паузи, скосена част не променя цвета си и да остане червено, в хода на инжектирането изглежда черен.
Shigella SPP. glyukozopozitivny, не laktozootritsatelny произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната (със или без паузи тях, в зависимост от серотип), скосена част не променя цвета си и да останат пурпурно.
Б. Окончателното идентифициране на чиста култура (определяне на таксономичния позицията на изолиран микроорганизъм до ниво вид или вариант) и определяне спектър разпределени култура чувствителността към антибиотици.
За идентифициране на чиста култура на този етап на изучаване на биохимични, генетични, серологични и биологични характеристики (таблица. 8).
В рутинна лабораторна практика при идентифицирането, не е необходимо да се научат всички свойства. Ispolzuyutinformativnye разположение, прости тестове са достатъчни, за да се определи вида (вариант) доставки на изолиран микроорганизъм.
Свързани статии