Определяне на гонадотропин-рилизинг хормон в урината дава възможност да се учат функцията гонадотропичен хипофизната. Метод за определяне на гонадотропин хормони в урина GS Stepanova въз основа на тяхната адсорбция на молекулното адсорбента - каолин от урината в кисела среда, алкална елуиране на каолин и утаяването на петкратно обем студен ацетон.
Както бе предложено процедура Детоксикация тройна промиване на утайката с чист ацетон, последвано от трикратно промиване с етер наркоза. Ежедневно урина се събира без консерванти, се съхранява в хладилника. Дългосрочно съхранение не е желателно. От дневно количество от 1 литър на урината се нагласява с концентрирана оцетна киселина до рН 4 (ако дневно изхода на урина е по-малко от 1 литър, долива с дестилирана вода до 1 литър). Към подкислява урината се прибавя 50 мл 20% воден разтвор на каолин суспензия и сместа се разклаща в продължение на един час на вибратор. Каолин с адсорбирания него гонадотропин хормон се събира в центрофужна епруветка, центрофугиране с вместимост 500 мл в продължение на 10 минути при 2500-3000 об. Супернатант, съдържащ разтворими токсични вещества и неорганични соли се изхвърля.
В центрофужна епруветка за да се утаи каолин излива в 70 мл 0.1N. разтвор на натриев хидроксид, утайката се разпрашава до получаване на хомогенна суспензия. Проверка на рН и, ако е необходимо, се коригира с оцетна киселина до 10 литра. Суспензията се центрофугира за 15 минути при 2500-3000 об. След центрофугиране, супернатантата (алкален екстракт) се излива в цилиндъра със запушалка с вместимост 500 мл, съдържаща 350 мл студен ацетон. Цилиндърът се поставя в хладилник за 18 до 20 часа за пълно утаяване на гонадотропини, които попадат под формата на светлокафяво люспи. След 18-20 часа прозрачен супернатанта ацетон слой се изхвърля. остатък с ацетон, утайката се прехвърля в центрофуга флакон 25-50 мл и се центрофугира за 10 минути при 3000 оборота в минута.
Както Детоксикация процедура промиване се повтаря три пъти каолин-ацетон се утаява 20-25 мл чист ацетон и три пъти с 20 мл етер за анестезия. След промиване с етер, утайката се суши във водна баня при 30-40 ° С до отстраняване на следи от етер. Такова суши екстракт може да се съхранява в хладилник за 12 месеца или повече (съхраняван при същите тръби, в които се извършва промиване). Изсушената утайка е светлокафяв прах с тегло 450-950 мг.
екстракт HCG се инжектира подкожно веднъж на ден в продължение на три дни, незрели женски бели мишки на възраст от 20-22 дни, с тегло 7-9 грама на 72 часа след първата инжекция, животните се обезглавяват. Изрязва матката и яйчниците, без дисекция течност, филтърна хартия, суши се и бързо се претегля на усукване баланс. За да контролира използването на теглото на матката в интактни животни (5,6-7,8 мг). Всяка "основен" се определя в екстракта 2-4 разреждания.
теглото на матката под влиянието на гонадотропин се увеличава 7-9 пъти. Резултатите от изследванията се определят в миши-матката единици (MIU). 1 ММЕ е това количество на гонадотропин, който е в състояние на увеличаване на теглото на матката на незрели женски бели мишки Na 100% срещу контрол.
При жени с нормален менструален цикъл, яйчниците дневно екскреция на гонадотропини варира 7-174 ММЕ, менопауза - 274 ± 11.5 ММЕ.
Свързани статии