Ръководство за практическо обучение в областта на микробиологията

Метод, основан на получаване растеж микроорганизъм директно върху предметно стъкло, позволява микроскопско наблюдение на процесите на растеж и развитие, влиянието на токсични и други агенти за тези процеси. В препарати не нарушават естественото разположение на клетките в нарастващата koloPreparat "висящи капка". Спад на суспензия линия или микроорганизми конвенционален писалката се нанася върху стъкления лист, който се завърта надолу и се поставя капка от специален предметно стъкло с вдлъбнатината (отвор) в центъра. Drop трябва да висят свободно, без да докосвате краищата и дъното на кладенеца. Ръбовете на ямките предварително смазват с вазелин. Спадът се капсулира във влажна камера, което прави възможно наблюдение на обекта на много дни. За дългосрочни наблюдения се използва стерилен стъкло и суспензията на микроорганизми се получава в течна хранителна среда.

НОИ. Растежът може да се извърши при аеробни или анаеробни (покривно) условия.

Агар филм може да се нанася върху стъкления лист и се готви лекарството, "висящи спад". В такъв препарат може да се наблюдава движение на плъзгащи бактерии тип.

6.2.2. Състави фиксирани клетки се оцветяват микроорганизми

Получаване фиксирана оцветени препарати включва етапите на: получаване на намазка, сушене, фиксиране и оцветяване.

Получаване на намазка. На обезмаслено алкохол плъзгащ се поставя малка капка чешмяна вода и се прехвърля в малко количество й контур "смачкана капка" на материала, както за лекарството. Получената суспензия беше равномерно намазка контур на площ от 1-2 cm2 възможно тънък слой. Намазка трябва да бъде толкова тънка, че се суши след готвене.

Изсушаването намазка. Най-добре е да изсъхне на крайния продукт при стайна температура на въздуха. Добре подготвени тънка намазка изсъхва много бързо. Ако сушене намазка запази, лекарството може да се нагрява леко в струя топъл въздух над горелка силен огън, поддържане на стъкло на намазка. • Тази операция трябва да се извършва внимателно, без да се прегрява натривка или микробните клетки са деформирани.

Определяне на лекарството има няколко цели: да убие микроорганизмите, т.е. безопасни да се направи по-нататъшно лечение, не, б и; ..? осигури по-добра адхезия на клетки на стъклото; направи намазка по-податливи на оцветяване, тъй като мъртвите клетки се оцветяват по-добре, отколкото живеят. Най-често срещаният метод е определянето на топлинната обработка. За това лекарство обикновено се извършва три пъти през най-горещата част на пламъка, държейки намазка слайд нагоре. Да не се прегрява инсулт, тъй като в този случай настъпват промени груби клетъчни структури, а понякога и на външния вид на клетките, например тяхното свиване. За да се изследва фината структура на клетките прибягват до определяне на различни химикали (вж. Допълнението). Namazok определяне течност се излива, или лекарство за определено време потопен в държач на стъкло.

Оцветяване. Клетките се оцветяват микроорганизми главно анилинови бои. Разграничаване киселинни и основни багрила. Като кисели багрила са тези, в които йон придава цвят (хромофор) - анион. В основния хромофор багрило е катион. Примери на кисели багрила се еозин еритрозин, Нигрозин, магента киселина; Всички тези бои са на свързване с цитоплазмата етични компоненти на клетката. Основни багрила - метилен синьо, основния фуксин, тинтява, кристално виолетово, сафра-нин - интензивно се свързват с ядрени компоненти на клетки. Високата концентрация на ДНК и рибозомна РНК на бактерии в клетката го прави по-чувствителни към основни багрила. В тази връзка, в микробиологичната практика се използва почти изключително основни багрила.

Има прости и диференциални методи оцветяване за микроорганизми. С една проста цвят да рисува върху цялата клетка, така че да се вижда ясно, неговата форма и размер. Диференциална багрило оцветяване показва, не всички клетки и някои от неговите структури. С помощта на диференциално оцветяване разкрива някои клетъчни структури и заместващи средства.

За прост оцветяване на микробни клетки, обикновено са фуксин, тинтява виолетово, метиленово синьо. Фиксираната Препаратът се поставя върху стъклени успоредни ламели, разположени над кюветата и багрилото се излива в 1-3 минути. Погрижете се, че по време на Оцветеният разтвор се боядисват намазка не изсъхне. Ако е необходимо, се налива ново петно ​​в частта за боя.

До края на получаването на цвят се промива с вода, докато течащата вода е безцветен. След това формулировката се суши на въздух или леко се блотират с филтърна хартия, се поставя върху оцветени намазка спад на потапяне масло и разгледана с лещата 90H- За получаване на по-чисти препарати от багрилото се излива върху намазка покритие филтър хартия. Методът на синьо оцветяване в модификацията позволява използването на багрилни разтвори вместо филтърна хартия, предварително накисната в багрило.

При правилно оцветени и добре измити препарат поле на светъл и чист, боядисани само микробни клетки. Фиксирани и оцветени препарати могат също "пръстови отпечатъци". Фиксирана, оцветени препарати могат да се съхраняват за дълго време.

Формата на клетки, и комбинации от тях (вериги, контакти, пакети и т.н. тетрада. Г.) разкриват, като правило, препарати "смачкана капка" в светло поле или фазов контраст микроскоп. За да се определи клетъчната форма малки пръчковидни бактерии като Serratia marcescens, получаване на медикаменти фиксирани и оцветени клетки по прост начин. Клетки малки бактерии имат издатини (Stella родове, Caulobacter, Prosthecomi-crobium), е целесъобразно да се разгледа в тъмно поле. Природен подреждане на клетки в колония микроорганизми и спори и спорофори актиномицети и филаментозни гъби изследване на лекарство "отпечатък".

Трябва да се помни, че възрастта на състава на средата и култура условията на културата значително да повлияе на морфологията и цитологията на микроорганизми.

6.2.3. Определяне на микробни клетъчни размери

микробни клетки се измерва при окуляра на микроскоп през линия - зрителен микрометър или микрометър винт. За по-добро използване на живо измерване, вместо фиксирани клетки, тъй като фиксация и багрене на клетките води до известна промяна в истинската им размер. Удобно определи размера на клетката, като се използва фазово-контрастен устройство. Ако клетките са подвижни, препарат или леко се затопля до спад на суспензията се прибавя капка 0.1% воден разтвор на агар. размер Cell изразена в микрона (микрона).

Очно микрометър е кръгла стъклена плоча, която е гравирана в дължината на централната линия на 5 mm. Линията е разделен на 50 части. Очно микрометър се вмъква в окуляра. За тази отвинтената окуляр очна леща се поставя в гнездото като очни отделения микрометър и завинтва обектива. Въпреки деления очно не mnkrometra директно измерване на количеството клетки, тъй като последната се гледа през обектива и окуляра, разделителна линия - само чрез горната окуляра на обектива. Ето защо, преди да се пристъпи към измерените стойности на клетките, е необходимо да се определи зрителен микрометър в разделения за увеличението на микроскопа, това, което е направено с помощта на обективен микрометър.

Обективната микрометър (Фигура 53). - метална плоча с отвор в центъра. дупка добавя стъкло, върху което дължина линия от 1 mm. Тя е разделена на 100 части, т. Е. участък цел микрометър съответства на 0.01 mm или 10 mm. За да се определи цената на очно отделения микрометър цел микрометър е поставен на сцената на микроскоп и да се съсредоточат при ниско увеличение. Онлайн изображение се премества в центъра на зрителното поле, и едва след това

сменяте обектива на тази, в която ще се определя от размера на клетката. Преместването на етапа на микроскоп и превръщането микрометра окуляра определени така, че техните мащаби са успоредни и се припокриват един с друг. стойност участък определя от принцип очно микрометър нониус, т. Е. Смесват едно от отделенията на цел и очно скалата на микрометър и са вследствие на тяхната комбинация (фиг. 54). Определя броя на районите на обективна разделението на микрометър окуляр съответства на 1

Фигура 54 Определяне на цените разделящи цел

mikrometra- / - разделяне на обективната микрометър; 2 - разделяне на зрителен микрометър

Foot микрометър. Например, разделяне на обектно-2 микрометъра (20 микрона) съответства на 5 деления зрителен микрометър следователно един участък окуляр микрометър е 4 микрометра (20: 5). Ако сега се постави на подготовката на микроскоп с микробните клетки и да го разгледа в същото увеличение, е възможно да се измери размера на клетката. За да направите това, определи какъв брой подразделения на очна линия съответства на размера на измерената обекта, и умножете това число чрез разделяне на цената на един зрителен микрометър.

Той е удобен за определяне на размера на клетките с винт зрителен микрометър MOB-1-15. Зрителен микрометър винт закрепена към тръба на микроскопа, след премахване на окуляра. винт окуляр микрометър има скала стойност определен участък от 1 mm за определяне на размерите на големи обекти и преместване на стъклена плоча с кръст. Плочата е свързан с микрофон