Когато култивирани растителни тъкани и клетки от особено значение стерилизиране инструменти и културална среда. Стъклени подлага да изсъхне горещ въздух или наситена водна пара. За тази цел няколко опции прилагат стерилизация: съдовете се нагрява в пещ с горещ въздух при температура от 180 ° С (експозиция на 30 минути) или 160 ° С (60 излагане мин) или се съхраняват при температура от 105 ° С в продължение на 4-5 часа Освен това, допълнително. стерилизация на прибори минава през автоклав среда.
Стъклени в която гъбична или бактериална инфекция, е необходимо първо да се изплакнат с топла вода и детергент, и след това се оставя в продължение на няколко часа, излива се в смес от хромова него (калиев бихромат) се засича. Последният има много силно изразени окислителни свойства. Вместо хром смес може да се използва натриев хидроксид или кристал сода. ястия, последвано от 6 пъти изплакнете в течаща вода, 2 пъти - в дестилирана вода и се поставят в продължение на 2 часа в пещ при 105 ° С
Метални инструменти, служещи за изолиране на експланти и ги манипулиране (остриета, скалпели, пинсети) и стъклени чаши, петриево преди обработката чаши трябва да хартия и се подлагат на обработка в автоклав при налягане от 2 атмосфери и температура 121 ° С в продължение на най-малко 60 мин. След стерилизацията, всички материали трябва да бъдат добре изсушени чрез изтласкване.
Има два основни начина за стерилизация на хранителни среди - автоклав и филтриране. В първия случай, полученият разтвор се излива в предварително стерилизирани в пещ блюда за култивиране, и след това се стерилизира в автоклав при налягане от 0.75-0.9 атмосфери (температура 110-115 ° С) за 20-25 минути. първо могат да бъдат стерилизирани чрез автоклавиране голямо количество среда в един екран, а след това се изсипва в ламинарен бокс в стерилна ястия култура. Въпреки това, по наше мнение, последното е по-трудоемък. Освен това с този метод на разпределяне среда увеличава вероятността от инфекция. Тази последователност е по-приемливо за малко количество среда.
Във втория случай, стерилен филтър Seitz Berkefelda, Shamberlana свещи, мембранни филтри, от съществено значение за получаване на термолабилни съставни течности (някои растежни стимулатори, витамини, антибиотици, аминокиселини, растителни екстракти), които се унищожават, когато автоматичното klavirovanii. Филтриране среда (студена стерилизация) се използва и за получаване на смеси от ензими и изолиране на протопласти изолира, медии с биологично активни компоненти, течни среди.
Хранителна среда, съдържащи органични добавки, такива като кокосово мляко, картофи отвара и др дезинфекцирани чрез филтруване, като се използва специален филтър от инфузорна пръст, кондензиран стъкло, или целулозни естери.
Въпреки това, пълна стерилизация може да се постигне само в фракционна на процес, който обикновено се извършва в апарат на Koch. Техниката се състои от 2-3 пъти отоплителни прибори водна пара до температура от 90-100 ° С с 24-часови интервали. Първата нагряваща води до унищожаване на вегетативни форми и последващо - до смъртта на микроорганизми, които се образуват при температура от 25 ° С от склероции между отопление.
Фракционна използва за стерилизация на хранителни среди, съдържащи съединения, които се разпадат при високи температури (например, гиберелини са инактивирани при температури над 90 ° С). Същото важи и за захари, които карамелизиране при високи температури.
пастьоризиране зависи от количеството на ястия, които бяха разпространени хранителна среда. Епруветките с средата се стерилизират 15 минути при 115 ° С Колба, съдържаща 100-500 мл среда, дезинфекцирани продължение на 30 минути при температура от 121 ° С и 45 минути при температура от 115 ° С Колба, която е от 500 до 5000 мл среда и се стерилизира в автоклав в продължение на 35-40 минути при температура от 121 ° С и 50 минути при температура от 115 ° С
Изместване ястия мл
време на стерилизация при 121 ° С (1 атм), мин
След приключване на стерилизация среда в камерата за автоклав трябва постепенно намаляване на налягането и температурата. Капакът на автоклава да се отвори само след като манометърът е установен на ниво "0". В противен случай, внезапна промяна в средно налягане може да вари мигновено, разливане от съдовете, в които се провежда стерилизацията и омокрящи на капака (което може да доведе до допълнително инфекция). В същото време трябва да се внимава, така че автоклава се намалява налягането в момента манометъра на ниво "0"; друго капака на автоклав да смучат поради образуването на градиент на налягането. Ако това се случи, трябва да имате къса (1,5-2 минути) завъртете ключа за превключване на автоклава, следван от стерилизационна камера покритие може да се отвори без усилие.
Чиния с хранителна среда, след стерилизация е поставен в специален шкаф за съхранение готов културална среда и се инкубират в продължение на 3-5 дни за откриване на гъбична или бактериална инфекция.
За уплътняване на културалните съдове могат да се използват различни тапи. Днес, обща за еднократна употреба пластмасови изделия, но освен това се използва широко в ежедневието стандартни контейнери от 250 мл с калай капачки, ерленмайерови колби (250 мл) и така нататък. Сонди с диаметър 0,5-0,8 капачки мм и калаени вкарана в него пяна тапа (за вентилация). В допълнение, той помага за премахване на градиента на налягане, когато хранителна среда се стерилизира. Ако използваните памучно марля запушалки, те могат допълнително да бъдат защитени срещу проникването на инфекция фолио капачки. Алуминиево фолио е много лесно да се справят и да го често се използва; осигурява подходяща вентилация на културалния съд, и в същото време предотвратява бързото изсъхване на културалната среда. Полиуретанови тапи, използвани за затваряне на тръбите и колбите трябва първо да се промиват с топла вода с малко количество препарат, след това се изплакват няколко пъти с чешмяна вода, а след това - в дестилирана вода. тях се суши при температура 105 ° С в продължение на 2,5-3 часа. Подобна процедура се подлага на покрива и алуминиевото фолио, след проверка на целостта на
Създаване на уеб сайтове и дизайн Para-Diz.com.ua
Свързани статии