Определяне на състава на хранителната среда включва, че в този случай ще се разглеждат и такива фактори като биофизични рН, температура, доставката и отстраняване на молекулен кислород, са от решаващо значение за растежа на всяка бактериална култура. Температура, аерация и налягане определя от условията на култивиране, редокс потенциал зависи от състава на хранителната среда и условията на култивиране. Мониторинг на редокси потенциал е от особено значение при отглеждането на obligately анаеробни бактерии.
Желатин - кисела азот-съдържащ продукт, получен чрез смилането на кости и хрущяли. Като твърди хранителни среди са широко използвани като гел листове въведен в практиката микробиологичен SN Vinogradskii. За растежа на микроорганизми се използват органични форми на азот често се използват месо-пептон среда: месо-пептон бульон, месо месо-пептон агар и желатин.
Месо пептон (ВСН). За получаването на носителя на месо-пептон използвани бульон, който беше получен както следва: 500 г от фино нарязани от прясно месо без кост, мазнини и сухожилие излива в емайла тиган 1 литър питейна вода, загрята до 50 ° С и се оставя да се влеят в продължение на 12 часа при стайна температура или 1 час при 50-55 ° с Месо притиснат, екстрактът се филтрува през марля със слой от вата, варени в продължение на 30 минути за коагулация на колоидни протеини и се филтрува два пъти (за първи път през памучна марля, а вторият - през филтърна хартия). Филтър долива с вода до 1 L, излива се в колбата, запечатани с памучни запушалки и се стерилизира при 120 ° С в продължение на 20 минути (колби тръба затворен отгоре капачките на хартията). Тапи за уши трябва да бъдат компактни, тъй като те са филтър предотвратяване проникването на бактерии от въздуха след стерилизацията. бульон месо може да се използва по всяко време за приготвяне на съответната медия. Ако те са готови да се борят, преди стерилизация не е необходимо. Често, ин витро месо инфузия варено заедно с месо и след това месото се оттича. Буйон получава добро качество. Ако е желателно да има много висока месо бульон хранителни вещества по време на инфузията месо се допълва с вода и се подкиселява слабо пепсин бульон със солна киселина. Пепсин допълнително хидролизира протеинов месо съединение и количеството на несмилаеми хранителни вещества бактерии нараства. Месо може да замени екстракт месо, го приема до 5 г на 1 литър среда.
За получаването на месо-пептон бульон до 1 литър бульон се прибавя 5,10 грама на пептон (пептон - първи протеин хидролиза продукт с високо молекулно тегло), за да се увеличи калорийното съдържание на средата, и 5 г натриев хлорид, за да се създаде осмотична активност. Средата се нагрява до разтваряне на пептон, като се разбърква непрекъснато. След установяване на неутрален или леко алкална реакционна среда, растящите 20% разтвор NagCOa (синка за пране на мокро лакмусова хартия червено, фенолфталеин с още показва алкална - това добавяне към средата на цвят порцеланова чиния розово не се открива). Удобен за използване индикатор bromtimolblau. 1-2 капки, които дават със стъклена пръчка в порцеланова чиния и бульон се добавят капка. В неутрална среда bromtimolblau бутилка зелен киселина - жълт, алкална - синьо. След създаването на реакционната среда се кипва отново 5-10 минути и протеини, пресечено от промяна на реакционната смес се филтрува през филтърна хартия без изясняване бульон или изяснени си протеин. Прозрачен месо-пептон бульон се разпределя във флакони, затворени с тапи от памук и се стерилизира при 120 ° С в продължение на 20 минути.
агар месо пептон (MPA). За 1 литър месо-пептон бульон се прибавят 15-20 грама на ситно нарязан агар. Средата се нагрява до разтваряне на агара (неговата температура на топене 100 ° С, изсипва точка на - 40 ° С) е разположен леко алкална реакционна среда с 20% разтвор Na2COa през фунията и се излива във флакони (10 мл но за отливки в чаши - агар колона и 5 мл за скосена, наклонена агар). Разлив агар е необходимо да се наблюдава и след това краищата на тръбите са сухи, в противен случай корк придържаме към стъклото. Епруветките с средата се стерилизира в автоклав при 120 ° С в продължение на 20 минути.
Месо пептон-желатин (NRM). В 1 л месо пептон бульон на пречи 100-150 г желатин. Температурата на топене зависи от процентното съдържание на среда. 10% желатин се топи при 24 ° С, 15% - при 25 ° С През лятото време средата се получава чрез прибавяне на 15% желатин. След разтваряне на желатин с леко загряване в среда регулира леко алкална реакция (като ВСН и ИПП), кипи в продължение на 5 минути, след което се охлажда -до 40-50 ° С В същото време яйчен белтък се разбива с малко вода, да го излее в охладен желатин среда, разклаща се добре и се загрява отново. Средно след нанасяне на протеин става прозрачен. Тя се филтрира през фуния нагрява дозира в епруветки и се стерилизира чрез преминаващ парен котел Koch, затопляне среда в продължение на 30 минути при 24 часа 3 пъти.
Картофена агар. 200 г пречистена вода и се промиват картофи нарязани на парчета, 1 литър питейна вода, вари в продължение на 30 минути. Бульонът се филтрува през памук и се регулира до първоначалния обем. Към получената течност се прибавят 2% агар, загрява се до неговото разтваряне и се оказва неутрална среда (рН 7.0). Средата се стерилизира при 1 атмосфера в продължение на 20 минути.
Жълт агар. Получаване на жълт За добавяне 2,5-3% агар, загрява се до неговото топене, филтрува се през памук и се стерилизира по същия начин като бира.
Обезмаслено мляко. използва обезмаслено мляко за получаване на хранителна среда, т.нар обезмаслено (мазнини в млякото се отразява отрицателно на растежа на някои микроорганизми). Обратно, получен чрез отделяне на мляко, загрява се до 34 ° С Дебел могат да бъдат отстранени и защита на мляко. Стерилизация на мляко трябва да се има предвид, че тя не може да издържи дълго време в автоклав, така че лактоза (млечна захар), съдържаща се в млякото, може карамелизира. Обезмаслено мляко се разпределя в стерилни епруветки и се държи при 115 ° С (налягане 0,5 атм) в продължение на 15 минути. Преди стерилизация киселинност обезмаслено мляко не трябва да надвишава 22 ° Търнър, в противен случай млякото ще пресичам. След стерилизацията да се поддържа в продължение на три дни в инкубатор при 30 ° С, за да предизвика развитието на спорообразуваща и други топлоустойчиви форми. След 3 дни на всяка епруветка с сърфиране мляко и тръби, които са еволюирали микроорганизми изхвърлят. Когато автоклав понякога се разглежда като резултат от мляко покафеняване карамелизиране на лактоза и казеин пептонизация. При продължително стерилизация дъното на казеин тръба утайка, която може да бъде частично peptonizirovatsya. Overheated запечени мляко като средство не може да се използва.
Свързани статии