При съхраняване на антителата при температура под нулата, е важно да не се използват bezmorozilnye хладилници. Конвенционалните домашни хладилници са bezmorozilnymi, и те са свободни цикли размразяване на няколко пъти, за да се предотврати образуването на скреж.
Конюгирани антитела трябва да се съхраняват в тъмно бутилки или в бутилки, покрити с алуминиево фолио.
Химични модификации, такива като окисление, и деградацията на протеолитично на протеини се случва при умерена температура, но степента на тези реакции е много по-изразено при високи температури. Антитела обикновено се съхраняват при ≤ 4 ° С в чиста и стерилни стъклени контейнери или полипропиленови флакони. Съхранение при стайна температура често води до разграждане и / или инактивиране антитяло, обикновено в резултат на растежа на микроорганизми. За краткосрочно съхранение (от 1 ден до няколко седмици) разтвори на антитела могат да се съхраняват при 4 ° С без значителна загуба на активност.
Криозащитни глицерол и етилен гликол
Образуването на ледени кристали може да унищожи структурата на протеина, и по този начин да доведе до загуба на ефикасност на антитела. Криозащитни като глицерол и етилен гликол, може да попречи на образуването на водородни връзки между водните молекули и по този начин намаляване на замръзване на прибавяне към водния разтвор. температурата на замръзване зависи от състав / концентрацията на криопротектори. Виж таблица 2.
Таблица 2. точки замразяване глицерол и етилен гликол (в градуси по Целзий) при различни концентрации (процент%) във вода.
Забележка: етиленгликол е токсичен и трябва да се използва с повишено внимание.
Ако температурата на съхранение е под точката на замръзване с криозащитни към разтвор на антитялото, разтворът ще се втвърди. Въпреки това, вместо на образуването на ледени кристали, встъкляване може да настъпи в случай на криоконсервираните клетки / ембриони с DMSO. Процесът на встъкляване стъкло, структурната цялост на антитялото се запазва.
За подобряване на стабилността, глицерин или етилен гликол се добавя до крайна концентрация от 50% и антителата могат да се съхраняват при -20 ° С разтвор на антителата трябва да се съхранява в малки обеми, за да се избегнат повтарящи се цикли на замразяване-размразяване.
Важно е да се използва стерилен глицерол така като глицерол могат да бъдат замърсени с микроби.
Фигура 1. Натриев азид при различни концентрации инхибира растежа на грам-отрицателни бактерии. [2].
Стерилизация и антимикробни съединения
Антитяло препарати трябва винаги да се стерилизират чрез филтруване при използване 0.45 микрона филтър и трябва да се работи при асептични условия за предотвратяване на микробно замърсяване.
Антимикробни средства, като например натриев азид (NaN3) при крайна концентрация от 0.02-0.05% (т / о) и тимерозал в крайна концентрация от 0.01% (т / о), за да инхибират растежа на микробите.
Натриев азид (NaN3) е токсичен за повечето клетки и организми, включително хора (вж. Фигура 1) [1]. Въпреки това, грам-положителни бактерии (стрептококи, пневмококи, лактобацили), устойчиви на натриев азид, вж. Фигура 2) [2] [3] [4]. Натриев азид инхибира цитохром оксидаза в митохондриалната електронна транспортна верига и е, например, апоптоза в RGC-5 клетки [5]. Антитела в натриев азид разтвор не трябва да се използва директно в живите клетки или в изследвания ин виво. Освен това, натриев азид предотвратява повечето реакции на конюгиране. Натриев азид може да бъде отстранен чрез гел филтрация или диализа.
Забележка: Натриевият азид е била използвана в превозни средства старши поколение издава възглавници за безопасност.
Фигура 2. Натриев азид не може да инхибира растежа на грам-положителни бактерии. [2].
Протеазни инхибитори предотвратяват протеолитичното разцепване на протеини. Протеолиза антитела могат да бъдат важен въпрос за съхранение на продукти от асцитна течност и серум, така че асцит и серумни препарати съдържат протеаза. Студената метод за съхранение и / или протеазни инхибитори могат да бъдат използвани за решаване на този разграждане.
Антитела в разтвор (1 мг / мл) по време на съхранение.
пълнител носител протеин или протеин, като пречистен говежди серумен албумин (BSA) или желатин, могат да бъдат добавени за разреждане на антитяло към крайна концентрация 1-5 мг / мл (0.1-0.5%) протеин.
Сух лед при съхранение и транспорт
Последните изследвания показват, че сух лед по време на съхранение и транспорт на протеина може да причини подкисляване разтвор за съхранение и ще предизвика агрегация на протеини (с образуване на утайка), особено atsidnymi протеини (протеини с р! По-малко от 7) [6]. Поликлонални IgG са склонни да се atsidnymi с р! В диапазона 4.7-7.5 [7]. Запечатаните флаконите с газ и / или газове запечатани пластмасови торбички (за опаковане бутилки) трябва да бъдат използвани за свеждане до минимум увреждане в допълнение към повторно еквилибриране на проби при -80 ° С във фризер в продължение на няколко дни. Пакети Dri-Shield бариера за влага на чанти от 3M, продукти Thermo Scientific ™ Nunc ™ Cryoflex и IMPAK пакети като 0203PM56OZETN и 05MP081OZE, могат да бъдат полезни.
Ефектът на молекули на антитела окисляване е широко изследван, особено за терапевтични антитела. Метионинови остатъци в вериги на антитела структурни обикновено са основният мястото на окисляване, когато са изложени на интензивна светлина антитяло и / или при повишена температура [8]. Антителата съдържат двете интра- и mezhdutsepochechnuyu дисулфидни връзки. Обикновено използваните антиоксиданти, такива като 2-Ме и DTT, не може да предотврати дисулфид прегрупиране [9]. докато друг антиоксидант - метионин не допринася за преструктурирането на дисулфидни групи и може да бъде най-добрият антиоксидант за съхранение на антитела [All Fitchmun, Somatek, Сан Диего, Калифорния, САЩ].
Активност едва губи при серума е директно се съхранява в продължение на десет години при -20 ° С Въпреки това, след пречистване на антитела, известна загуба на активност се наблюдава в продължение на много години, макар и много бавно. Също така изглежда, че глицерол не е необходимо за съхранение при -20 ° С в продължение на години, или дори десетилетия, ако антителата не са подложени на повтарящи се цикли на замразяване / размразяване. Антителата трябва да се съхраняват при висока концентрация.
Моноклоналните антитела могат да се съхраняват при -20 ° С в 50% глицерол. Също така е докладвано, че моноклоналните антитела могат да бъдат съхранявани в наситен амониев сулфат под формата на сферички при 4 ° С или -20 ° С в продължение на години, без загуба на активност или бактериален растеж okisleniya.Liofilizatsiya (сушене или сушене чрез замразяване от замразено състояние) осигурява алтернативна метод за стабилизиране на антитела, които не са устойчиви на замразяване условия. В повечето случаи, лиофилизирани протеини могат да се съхраняват при -20 ° С Лиофилизация изисква скъпо оборудване и отнема много време.
Антителата трябва да се съхраняват в затъмнена или покрити с алуминиево фолио контейнери.
Конюгиран с алкална фосфатаза ензими и други особено чувствителни към замръзване, и като цяло те трябва да се съхранява при 4 ° С след свързване на къси srok.Konyugaty антитела са най-добре се съхранява за дълъг период при -20 ° С с глицерол или етиленгликол при крайна концентрация от 50 %. Докато някои ензими конюгати могат да се съхраняват при -20 ° С без криопротектор, замразени проби трябва да бъдат предназначени за еднократна употреба за предотвратяване на повтарящи се цикли на замразяване-размразяване.
Fluorestsein- конюгирано антитяло
Флуоресценцията може да бъде намалена при излагане на светлина. Както при всички реагенти конюгирани с флуоресцентни маркери (не само антитяло), конюгати на антитела трябва да бъдат защитени от светлина. Fluoroforkonyugirovannye антитяло трябва да се съхранява при 4 ° С и никога zamorozhivat.
Lichstein Н, Сол М. изследвания на ефекта на натриев азид на микробен растеж и дишането: I. действието на натриев азид на микробен растеж. J Bacteriol. 1944; 47: 221-30 PMID 16560767
Lichstein Н, Сол М. изследвания на ефекта на натриев азид на микробен растеж и дишане: II. Действието на натриев азид на Бактериален каталаза. J Bacteriol. 1944; 47: 231-8 PMID 16560768
Lichstein З. изследвания на ефекта на натриев азид на микробен растеж и дишането: III. Ефектът на натриев азид на газ метаболизма на Б. субтилис и P. Aeruginosa и влиянието на Pyocyanine на газ борса на Pyocyanine-Free щам на P. aerugino. J Bacteriol. 1944; 47: 239-51 PMID 16560769
Свързани статии