В първия етап произвеждат генни конструкти - ретровирусни или плазмидни вектори. Например, за да "намаляване" на едноверижна РНК ретровирус или "отрязани" кръгова двойноверижна ДНК молекула добавя екзогенен плазмидна ДНК, съдържаща, например, мутантен човешки ген. Във втория етап, получени вектори трансфектирани в ембрионални стволови клетки (трансгенни). Получените многобройни колонии на стволови клетки се изследват посредством PCR за присъствие на желаната ДНК последователност. Вмъкване на екзогенна ДНК трябва да се случи в целевия ген, т.е. нормалната геномна алел трябва да бъде заместен от мутант (ген насочване). В третия етап, трансфектирани стволови клетки, съдържащи мутантния алел на гена се инжектират в бластоцист. Освен това, бластоциста се трансплантира в матката на приемна майка. възможно да хетеро- или хомозиготни мишки получаване на екзогенна ДНК genu.Esli След преминаване присъства в зародишни клетки и предава придобитата ген на мишката за тяхното потомство, животните се отглеждат с устойчива промяна в генома се наричат трансгенни.
· Нокаут и трансгенни мишки. Методология на хомоложна рекомбинация на ендогенни и екзогенни ДНК позволява напълно или инактивиране на целевия ген в целия организъм (нокаут. Knockout генен нокаут мишки), или гени, въведени с насочени мутации (чук-в. Knockeen ген, трансгенни мишки).
· Експресионните вектори. Плазмидът и вирусни вектори са проектирани така, че екзогенната ДНК е прикрепена към силна транскрипция промотор. Трансфекция на вектора в бактерии и дрожди, позволява да се получат големи количества рекомбинантни протеини (растежен хормон, интерферон, имуноглобулини). От млякото на трансгенни кози или крави, трансфектирани с експресионен вектор може да секретират различни рекомбинантни протеини, такива като лактоферин. Сред бозайници, лактоферин се среща само в млякото на жена и краве мляко с лактоферин може успешно да се замени кърмата с формула хранене.
· Трансгенни хора. Генетична трансформация на плодови мушици (Drosophila) и животните се извършва в много лаборатории по целия свят. Към днешна дата, раждането на генетично модифицирани човешки напълно реална. Но тези опити са неприемливи от морална гледна точка, поради разпространението на "изкуствени" мутации в човешката популация.
Свързани статии