• нанасяне на органични разтворители;
• разпространение на системите за двуфазни.
Както е известно, разтваряне на протеини във вода поради хидратация на отделните молекули, което води до образуване на около протеиновата молекула на вода (хидратация) черупки, състояща се от ориентиран в определени водни молекули пространство форма. Тази вода (хидратация обвивка) е различен от чист разтворител. Разтвори на различни протеини и крайната нестабилност под влиянието на различни фактори смущаващи хидратиране на протеини лесно утайка. Следователно, добавянето на протеинов разтвор на всякакви дехидратиращи агенти (алкохол, ацетон, концентрирани разтвори на неутрални соли на алкални метали) и ефекта на физически фактори (топлина, облъчване) води до обезводняване на молекулите и тяхното утаяване на утайката.
Осоляване. Когато не протеин осоляване соли на алкални и алкалоземни метали протеин обикновено губи способността си за повторно се разтваря във вода, след отстраняването на сол (чрез диализа, гел филтрация). Например: глобулини утаяват при 50% насищане, и албумини в 100% насищане с амониев сулфат. При загуба на протеинови молекули в пелетата е от голямо значение не само от концентрацията на сол, но температурата и йонната сила на разтвора.
хроматографски методи. метод хроматография разработен през 1903 г. от руския учен MV (. Или други вещества) цветни пигменти на базата на способността специфично се свързват с адсорбента, затворена в колона; Той се използва като сорбция и десорбция процеси. Използването на различни хроматографски методи - адсорбция, преградни, ionnobmennuyu.
Адсорбционна хроматография - адсорбент се активен въглен, алуминиев оксид или силициев диоксид. Той е широко използван за разделяне на протеини и други вещества.
Разпределение хроматография. Когато това е само твърда фаза носител за течната фаза. Видове хартиена хроматография, колонна където като стационарна фаза силикагел или нишесте използва.
Йонообменна хроматография. Йонообменни смоли са полимерни органични съединения, съдържащи функционални групи могат да бъдат включени в йонообменна.
Разграничаване основния анион (органични основи и амини), катионни обменители, съдържащи фенолни, сулфо и карбоксилни групи. Широко използвани DEAE (DEAE-целулоза), trietilaminoetil (TEAE) и аминоетил (AE) - целулоза.
Афинитетна хроматография (афинитет или хроматография) се основава на принципа на селективно взаимодействие със специфични протеинови вещества фиксирани към носителя. На цианоген бромид-активирани Sepharose (CNBr-Sepharose) се използва като носител, към който е прикрепен различни вещества - субстрат, коензим, антиген, хормон и т.н. Методът позволява един етап да се получи препарат високо пречистен протеин.
метод с гел филтрация или молекулно сито - са широко използвани за пречистване на протеин от примеси.
Използване на Sephadex (декстран, полизахарид от микробен произход, обработва се с отделен протеин) могат да бъдат отделени протеини с различни молекулни тегла, тъй като зърно Sephadex различни стаи имат различен размер на порите, които са в състояние да проникнат някои протеини с молекулно тегло.
Електрофорезата се основава на разликата в скоростта на протеини в електрическо поле, което се определя от големината на заряда на протеина при определени рН и йонна сила на разтвора. Първоначално на метода, разработен от A. Tizeliusom напоследък широко използван метод на зона електрофореза на протеини в различни медии - на хартия (целулоза), нишесте, полиакриламиден гел. метод диск електрофореза в полиакриламиден гел дава възможност да се получат до 50 протеинови фракции, т.е. Тя е с много висока резолюция.
Изоелектричното фокусиране на протеини - от амфолинен позволява да се изолират отделни протеини в препаративни количества.
Ултрацентрофугиране на градиент на плътност на захароза или цезиев хлорид е широко използван за пречистване и определяне молекулно тегло на протеини чрез утаяване константа (Svedberg единица - S).
Пречистване на протеина от примеси с ниско молекулно тегло се постига чрез диализа, гел филтрация, кристализация, ултрафилтрация. Когато диализа се използва полу-пропускащата мембрана (целофан kolloidinovaya филм), диаметър на порите, която варира в широки граници. Протеини обикновено чрез такава мембрана не дифундират и малки молекули лесно преминават през него в околната среда. Най-добри резултати осигуряват методи за гел филтрация и ултрафилтрация, като позволи като свободна от компоненти с ниско молекулно тегло и да се концентрира на протеините.
Методи за определяне хомогенността на протеини. Най-добри резултати дават ултрацентрофугиране, градиент на плътността, шофиране-полиакриламидна гел електрофореза, имунохимични методи.
Свързани статии