Целта на дейността: За да се запознаете с различни видове хранителни среди, използвани в областта на микробиологията. Научете как да се готви питателна среда за рецепти. Запознават с методи за стерилизация на културална среда.
Материали и оборудване: химически реактиви, колба, фунията, стъкло, плочки, филтърна хартия, марля, везни, рецепта хранителни среди, автоклав.
- Приготвя се хранителна среда IPA, Чапек агар, нишесте амоняк агар, картофено агарна среда глад, средата да се разделят на различни групи от микроорганизми.
- Оставя се да кипи и филтърната среда да се подготвят за автоклавиране.
- Запознават с методи за стерилизация на културална среда.
- Стерилизирано в автоклав среда под ръководството на учител.
Захранващи среди. Известно е много хранителен медии за отглеждане на микроорганизми (повече от две хиляди имена са класифицирани и Йохан Лукас Schönlein Левин през 1930 г), но броят на съставките, те са основни компоненти, е относително малък. Въпреки това, тези носители качество диапазон е много широк - от разтвори на неорганични соли, които могат да растат autotrophs до комплекс растежна среда, която се получава от месо хидролизати обогатен кръв или серум; те обикновено се използват за изолиране на инфлуенца тип микроорганизми стрептококи, които са силно взискателни в хранителна среда състав. Има два основни типа на културална среда: така наречените синтетични среда, основните елементи са точно известни (например, глюкоза-сол хранителна среда) и емпирично избран хранителна среда от естествен произход, съставът на която не е точно известни (те включват пептони, получени от частично хидролизиран протеин).
Изборът хранителна среда в голяма степен зависи от целта на експеримента. Хърбърт силно се застъпва широко разпространеното използване на синтетични медии растеж. Въпреки това, ние трябва да признаем, че те имат редица практически неудобства. Микроорганизмите, отглеждани на такива хранителни среди обикновено фенотипно се различават от тези, отглеждани на бульон хранителната среда естествено срещащи тип (например, състава и разделяне на скоростта). Много бактерии се нуждаят от голям брой фактори на растежа, както и за някои от тях, за да изкуствената среда все още не е намерен, на която те биха могли да се размножават. Възможно е, че всички тези неудобства, то в крайна сметка ще бъдат преодолени, но толкова дълго, колкото на средата с неизвестен състав, като например супи, приготвени от обобщен използва много широко, въпреки че те допринасят за експеримента неконтролируеми фактори.
Съставът на носители, използвани за отглеждане на бактерии, са необходими за изграждане на протеини цитоплазма органогенно азот, въглерод, водород, кислород неорганични съединения, съдържащи фосфор, калий, сяра, натрий, магнезий, желязо и микроелементи: кобалт, йод, манган, бор , цинк, молибден, мед и други. Всички тези елементи трябва да бъдат в хранителна среда за микроорганизми udobousvoyaemom съединение, изискванията на различни микроби в това отношение не са идентични. Необходимостта от кислород и водород отговарят бактерии дължи основно на водата да влезе в клетката. Поради естеството на азота асимилация микроорганизми са разделени както следва: един от тях се отстранява от прости амониев азотни съединения, а други се нуждаят от аминокиселини, и още други разцепват високомолекулни вещества - пептони, които са продукти на непълно ензимно разграждане на протеини. Строго паразитни видове бактерии пролиферират само в присъствието на нативен, т.е.. Е. Непроменено протеин. Източникът на въглерод за бактериите са основно различни въглехидрати: захари, полиалкохоли, органични киселини и техни соли. Бактериите необходимостта изпълнени неорганични елементи добавят към хранителна среда соли: NaCl, КН2 Р04. K2 HP04 и други подобни. Г.
Микроелементи, които действат като катализатори са необходими на химични процеси в много малки количества и влиза културалната среда с пептон, неорганични соли и вода. Наред с посочените по-горе органични и неорганични елементи бактерии изискват растежни фактори, които в ролята им съответстват Витамини за животни. Източникът на растежни фактори се добавя към културата средни продукти от растителен и животински произход, съдържащи в структурата си никотин, пантотенова, parabenzoynuyu киселини, витамини. Хранителните вещества могат да бъдат придобити само когато определен микроби реакция културална среда, тъй като пропускливостта на микробни клетъчни мембрани варира в зависимост от рН. Подхранването и физически условия, при различни видове микроби варира и това изключва възможността за създаване на универсална среда.
Последователност разграничи твърди и течни носители култура. Твърда среда се състои от; течни среди чрез прибавяне към него на адхезивни вещества, агар или желатин. Агар-агар (желе в малайски) - продукт от растителен произход, извлечен от водорасли. В вода агар-агар се разтваря при температура 80-86 ° С, гелове при 36-40 ° С използването на агар медии поради тяхната способност да поддържа плътността при температура 37 ° С даде възможност да растат микробите в оптимално за повечето от тях при температура от плътни среда. Желатинът - белтъчен материал от животински произход. Топлата вода при температура 32-34 ° С него набъбва и се разтваря, и при по-ниска температура се превръща в желе. Въпреки това, при рН под 6.3 и над 7.0 желатин плътност намалява и той се втвърдява слабо.
Изисквания към средата.
Захранващи среди следва:
1. Поддържайте необходимите храна микроби хранителни вещества.
2. Има реакция рН оптимум на видовете отглеждани микроб на.
3. Да имат достатъчно влага, тъй като микробите ядат законите на дифузия и осмоза.
4. Да изотоничен.
5. За да бъде стерилна, осигурявайки по този начин възможността да растат чисти култури от бактерии.
Захранващи среди са разделени в общо предназначение и специална среда.
Първата група включва говеждо-екстракт агар, хранителна среда, хранителен желатин. обща среда цел се използва за отглеждане на много микроорганизми и се използва като основа за получаване на специални носители, като към него кръв, захар, мляко, суроватка и други съставки, необходими за възпроизвеждане на определен тип микроби.
специален Културната среда са избираем (избори) и диференциална диагноза.
Избираем (селективна) среда. Принципът на създаване на избираеми хранителни среди, базирани на удовлетвореността на основните биохимични и енергийните нужди на вида микроби, които са предназначени за отглеждане. Специфичен състав и концентрация на микроелементи, растежни фактори под строг рН осигуряват оптимални условия за отглеждане на един или повече видове микроорганизми. При тях посев материал, съдържащ смес от различни микроорганизми се проявява преди растеж на видовете, за които тази среда е избираема.
Диференциална диагностика среда. Тези среди се използва за определяне на видовете, принадлежащи на микроба въз основа на особеностите на неговия метаболизъм. Според целта на диференциална диагностика медийна култура са разделени както следва:
1. среда за идентифициране протеолитично и хемолитична способността на микроби, които съдържат в своите протеинови вещества състав: кръв, мляко, желатин и др ...
2. среди с индиферентни химикали, които служат като източник на храна за някои видове бактерии и не се абсорбира от други видове.
3. Среда с въглехидрати и поливалентни алкохоли, съответстващи на ензимите за откриване.
4. Околна среда за определяне на намаляване на способността на микроби.
Структурата на диференциално-диагностичен среда за откриване на saccharolytic и редокс ензими, индикатори въведени: неутрално червено, метиленово синьо, лакмус тинктура, фуксин киселина, бромтимолово синьо, циан багрило воден rozolovuyu киселина. Чрез промяна на цвета си при различни рН, индикаторът показва наличието или отсъствието на разцепване, окисление или редукция съставка въведена в средата. Въпреки това, индикаторът е неразделна част от носителя за откриване на ензими. По този начин, присъствието на желатиназа и други протеолитични ензими в културата се определя от втечняване на желатина, сгънати яйцето или суроватъчен протеин.
Суха хранителен медии. Подготовка на хранителни среди - един от най-важните области на работа на бактериологична лаборатория. В тази връзка, биоиндустрията произвежда стандартни, консервирани, сухи хранителни среди за различни цели, за отглеждане на микроорганизми. Подгответе среда в предписанието, обозначен на етикета. Постоянството на състава, стандартна среда, простотата и лекотата на работа, лекота на транспортиране и съхранение са най-голямото предимство на сухо хранителни среди. След установяване на подходящо рН на средата се нагрява до кипене, филтрува се изясни, излива се в ампули, епруветки и се стерилизира. Трябва да се има предвид, че след стерилизацията средата става по-кисела.
Стерилизация на хранителни среди. Стерилизация на хранителна среда, се извършва по различни методи в зависимост от съставките, които са включени в състава им.
1. Синтетичен среда и всички агарна среда не съдържаща в тяхната структура на нативния протеин и въглехидрати, се стерилизират в продължение на 15-20 минути в автоклав при температура 115-120 ° С
2. Носителят с въглехидрати и мляко (което включва лактоза), желатин хранителен стерилизира с течаща пара при температура от 100 ° С или фракционна в автоклав при 112 ° С
3. среди, които включват протеинови вещества (в кръвния серум) зародишните намаляване фракционна или филтруване.
4. За стерилизация на хранителни среди, съдържащи в структурата на естествените протеини са мембранно филтриране през филтър Seitz.
Готови медийна култура е проверена за стерилност. За тази цел те се поставят в термостат при 37 ° С Medium, стерилизира в автоклав, се инкубират 1 ден, стерилизира с течаща пара - 3 дни.
Свързани статии