ПредишенСледващото

  • Лизис на клетки и клетъчни мембрани.

Клетките се разрушават механично или чрез ензимно третиране. Мембраните бяха разрушени чрез третиране с детергенти (navprimer, SDS) или хаотропни средства (гуанидин изотиоцианат).

  • Премахване на протеини (депротеинизация).

    Протеините се екстрахират с фенол, хлороформ, изоамилов алкохол. Тъй като тези органични плътност rastvoritley различна от плътността на водата чрез центрофугиране на клетъчния лизат, към който се прибавя фенол и хлороформ, образуват два различни слоя: ниска, представляващи разтвор на базата на органични разтворители, и горната съдържащ водния разтвор. В този случай протеините са денатурирани и се образува утайка, която е тясна лента на границата на водната и органичната фази. Когато фенол се уравновесява с буфер при неутрално рН, водната фаза ще съдържа веднъж ДНК, така и РНК.

    Изолиране на ДНК

    Ако фенолът беше уравновесена с буфер с кисело рН, ДНК ще бъде в по-ниска, органичния слой, и РНК - в горната, водната фаза.

    Изолиране на ДНК
  • Получаване на концентрираната фракция на нуклеинови киселини.

    Използвани утаяване на ДНК с етанол (izoprapanolom) в присъствието на сол (натриев ацетат) с последващо отделяне на утайка чрез центрофугиране и разтваряне на утайката от ДНК или адсорбция върху твърда подложка (например, стъкло) с последващо елуиране.

    Изолиране на плазмидна ДНК

    За да се изолира плазмидна ДНК от клетките с помощта на метода на алкална. По време на експеримента, променя рН, съдържащи геномна и плазмидна ДНК разтвор на алкална. В такъв рН стойност, всички DNA е денатурирана. Въпреки това, двойно-верижен плазмид ДНК верига по този начин остават свързани един с друг, тъй като плазмидът има пръстеновидна форма. В допълнително отгряване която се инициира промяна в рН до първоначалния разтвор, с дълга верига геномна ДНК, като се диспергира в разтвор при денатуриращи неструктурирана форма гъста пачка, и плазмидна ДНК верига успешно възстановяване на първоначалната структура. Сега плазмидна ДНК е лесно отделен от геномната ДНК по време на центрофугиране.

    Изолиране на ДНК

    Свързани статии

  • Подкрепете проекта - споделете линка, благодаря!