анализ на кръв
Цитохимикали изследване на левкоцити
Цитохимикали изследвания играят важна роля в диференциалната диагноза на хематологични злокачествени заболявания. Освен голяма теоретична стойност може да се отрече, тяхната роля за изясняване на различни форми на левкемия. Разработване на ефективни методи за диференциална диагностика и лечение на остра левкемия, особено остри деца лимфобластна левкемия, стана възможно едва след въвеждането в клиничната практика на цитохимикали диагностика.
Цитохимични проучвания са проведени в кръвни намазки, leukoconcentrate костен мозък. Те се основават на използването на специфични химични реакции за определяне на цвят в клетките на различни вещества. Когато цитохимични проучване използва полуколичествена оценка на резултатите, като се използва принцип G. Асталди (1957), въз основа на откриване на специфични оцветяване на различна интензивност. В изследваните елементи в зависимост от това е разделена на четири групи: отрицателна реакция (-), слабо положителен (+), положителни (++) и rezkopolozhitelnoy (+++).
За количествено определяне на резултатите преброяват 100 клетки на някои видове и ги диференцират в съответствие с принципа, броят на клетки със същата интензивност цвят се умножава по съответния брой предимства на тази група, сумата на тези продукти е еквивалентни единици (U). Ензимната активност се изразява като произволни единици, или като средна цитохимични фактор (ОЦК). Близкия цитохимични фактор се изчислява съгласно формула Keplou модификация Асталди и Verga:
където цифрите (1, 2, 3, 4) представлява интензивността на цвета; букви (А, В, С, D) - броят на клетките се преброяват с определен цвят интензитет (цитохимични реакция).
полуколичествен метод оценка е приблизителна, но сравнява разпределението на изпитваните вещества в различни клетки или клетки в същите клетки при различни патологични състояния. Все пак трябва да се има предвид, че цитохимикали метод може да се използва само като допълнение към други методи на разследване - морфологични, имунологични, цитогенетичен.
За сметка на гликоген основно предоставят енергийни клетки се нуждаят. По-специално, поради реакции образувани гликогенолизата енергия, необходима за фагоцитоза функция. Гликогенът е локализиран в цитоплазмата на клетките. PAS-реакция се използва най-често за цитохимични гликоген откриване или PAS-реакция (наречен реактив - перйодна киселина-Шиф).
PAS-положителна реакция може да произвежда вещества, като например гликозаминогликани, мукополизахариди, гликопротеини, mukoprotei HN и сътр. Гликоген могат лесно да бъдат разграничени от други вещества или проби със слюнка α-амилаза.
Проба от слюнка. Лекарството се поставят в прясно слюнка в термостат при 37 ° С за 30 минути, след това се оцветяват с описаната по-горе процедура. След инкубиране αamilaza лекарството, съдържащо се в слюнката, разцепва гликоген, и чрез взаимодействие с реагент на розово оцветяване Schiff не развива на гликоген.
Тест с α-амилаза. Разтворът на лекарството се поставя в α-амилаза (1 мл филтрува амилаза се разтваря в 40 мл 0,85% натриев хлорид) в продължение на 30 минути в термостат при 37 ° С
Референтни стойности. В намазки от периферна кръв и костен мозък на гликоген, съдържащи се в цитоплазмата на неутрофили различна степен на зрялост, но за предпочитане в по-зряла (като изобилие и дифузен фин пясък). В цитоплазмата на мегакариоцити и тромбоцити гликоген определя като единични големи зърна. В кръвта на здрави хора количеството интензивно оцветени неутрофили (+++) варира от 2-12% от общия брой на неутрофили, средната цвят интензивността на (++) - в рамките на 72-90%, леко оцветен (+) - 4 до 18 %. CBFV гликогеновите неутрофилите при здрави хора е 1,71-2,04 (Кост EA 1975), и в съответствие с VB Letsko (1970) - 2,52. В хора на преклонна възраст показва значителен спад в гликоген ОЦК до 1.98 (Германия VA Сергеев, TM 1972 г.).
Лимфоцитите от здрави индивиди гликоген се съдържа под формата на малки гранули е 10-12% от клетките. Гликогенът се намира в мегакариоцити под формата на гранули (от единични до 30-50), наподобяващ клъстери на тромбоцити. Броят на средните мегакариоцитни glikogenpolozhitelnyh 60% от мегакариоцити.
Клиничното значение. Увеличаване на броя glikogenpolozhitelnyh limfotsitov4 (70-80%) е типично за лимфопролиферативни заболявания, по-специално за хронична лимфоцитна левкемия (гликоген определя като гранули). Увеличаването на съдържанието на гликоген в неутрофили се наблюдава в различни възпалителни процеси, диабет, полицитемия вера. Намаляване наблюдава при агранулоцитоза, лъчева болест, хронична миелогенна левкемия - около два пъти в сравнение с нормата, особено в прогресия на заболяването (общо гликоген определя чрез биохимични техники, дори може да се увеличи поради левкоцитоза). Когато тромбоцитопенична пурпура и симптоматични тромбоцитопения брой glikogenpolozhitelnyh форми мегакариоцити значително намалени (след спленектомия се възстановява до нормални стойности).
В левкемични клетки в остра миелоидна левкемия гликоген или не се съдържа изобщо или дифузно разпределени под формата на фина зърнистост; остра лимфобластна левкемия - под формата на големи гранули разположени в цитоплазмата около ядрото; в остра левкемия монобластичната бластни клетки съдържат малко количество от дифузно оцветяване гликоген; под остър еритролевкемия в гранулирана форма гликоген открива в еритробласти.
Липидите са локализирани в цитоплазмата на клетки, предимно в мембрани на органели и се намират главно в неутрофилни гранулоцити. Те играят важна роля в пропускливостта на мембраната. клетки от костен мозък и периферна кръв включват прости липиди под формата на неутрални мазнини, свободни мастни киселини, и комплексни липиди - фосфолипиди. Цитохимични изследване се основава на използването на вещества, разтворими в липиди (Судан III, IV Судан, Судан Черно и др.). За откриване неутрална мастна използва Судан III, мазнини оцветяване оранжево. Липидите по-добре, идентифицирани от Судан черно (черно оцветяване). В хематологични изследвания често се използва петно петна Судан III.
Вижте техники за боядисване .:
Клиничното значение. Увеличаването на липидната ОЦК наблюдава при пациенти в напреднала възраст. Увеличаването на липид съдържанието на неутрофили, наблюдавани при остра миелоидна левкемия и monoblastny, с развитието на хронична миелоидна левкемия. Когато недиференцирани остра левкемия бластни клетки включват липиди в малко количество (2-3%). Намалена липид ОЦК отбележи терапевтичен глад. Редуцирано липидно съдържание в неутрофили намерени в ревматизъм, възпаление. В остра лимфобластна левкемия в бластни клетки не се разкриват липиди.
Пероксидаза (миелопероксидаза)
При хората, пероксидазата се детектира в левкоцити, тромбоцити, в млякото, както и в тъканите, където метаболизъм настъпва ейкозан-IDE. Простетични групи е Protogenes. Реакцията се катализира от пероксидаза, водороден пероксид се намалява от съединенията, действащи като донор на електрони като аскорбат, хинони или цитохром С. Реакцията катализирани от пероксидаза комплекс и има общ външен вид, както следва:
На пероксидаза е локализиран предимно в цитоплазмата на гранулоцити специфичен зърно, това е маркер на миелоидни клетки природата. Той отсъства в лимфоидни клетки. Поради специфичността за неутрофили, от най-ранните етапи на узряване, ензим, наречен миелопероксидаза. Пероксидазна активност е обект на големи колебания.
Вижте техники за боядисване .:
Референтни стойности. В кръвта на здрави хора пероксидазна активност открива главно в цитоплазмата на гранулоцити, в по-малка степен и непостоянни - моноцити. Ензимът се появява в клетки на етап промиелоцити и по-зрели миелобласти. ЛИМФОБЛАСТИ не съдържат пероксидаза. 3-16% неутрофили оцветяват силно положителни (+++), 60-90% - положителен (++), другата - ниска положителен (+) (Kost ЕА 1975). CBFV пероксидаза неутрофили в здрави хора е 2.5 (Letsky VB 1970). Еозинофилите се характеризират със силно положителна реакция на пероксидаза.
Клиничното значение. В бластни клетки висока ензимна активност в остра миелоидна левкемия. При пациенти с хронична миелоидна левкемия, особено в краен стадий, ОЦК се намалява до 1.6; слаб ензимна активност се наблюдава при остра левкемия монобластичната и отсъства в остра лимфобластна левкемия. Определяне на миелопероксидаза активност като маркер за миелоидна серия се използва за диференциална диагноза на остра миелобластна и лимфобластни левкемии. Намаляване на ензимната активност, наблюдавана при инфаркт на миокарда, ревматоиден артрит, туберкулоза, тумори.
алкална фосфатаза
Алкална фосфатазна активност е открита за първи път в етап metamyelocytes, се увеличава сегментния неутрофилите диференциация нагоре, а след това на стареене клетката се намалява отново. Ензимната активност се определя в специфични цитоплазмени гранули. Алкална фосфатаза се отнася до групата от хидролитични ензими разцепват различни фосфорни естери в алкална среда (оптимално рН 9,6), извършва хидролиза odnozamegtsennyh ортофосфат естери. Най-често срещаният метод на ензимната активност определяне азо свързване.
Вижте техники за боядисване .:
Клиничното значение. Увеличаването на ензимната активност в цитоплазмата на неутрофили, наблюдавани в полицитемия вера, хронична миелофиброза, апластична анемия. Повишена активност на алкална фосфатаза в цитоплазмата на неутрофили в остра левкемия nelimfoblastnyh - благоприятна характеристика, тъй като тези пациенти са по-вероятно ремисия. Увеличението на ензимната активност се открива в деца през първите шест месеца на жизнения 150-159 единици. Ензимни активност се увеличава по време на бременност в много възпалителни процеси, хронични чернодробни заболявания, инфекции, злокачествени тумори, диабетна кетоацидоза, като орални контрацептиви, синдром на Даун, инфаркт на миокарда и др. Рязък спад в активността на алкална фосфатаза (до пълно отсъствие) се наблюдава в хронична миелоидна левкемия. че може да служи като важно допълнение диференциална диагноза на хронична миелоидна левкемия и хронична миелофиброза и реакции leukemoid m ieloidnomu тип. Намаляване на ензимната активност се наблюдава при вирусни заболявания, включително инфекциозен хепатит, лъчева болест, сърповидно-клетъчна анемия, заболявания на съединителната тъкан.
кисела фосфатаза
Киселина фосфатазна активност се открива предимно в периферните кръвни лимфоцити и неутрофили (максимум в неутрофилите миелоцити); локализация свързани с лизозоми цитоплазмени клетки. Киселина фосфатаза е хидролитично ензим (оптимално действие при рН 5,2). За цитохимични изследвания са често използвани методи азо свързване. Naftolfosfaty под въздействието на кисела фосфатаза разцепен за образуване на свободна нафтол, който реагира с диазониевата сол. В резултат на това в местата, определени от ензимната активност на утайката на азо багрило на червено на зелен фон.
Вижте техники за боядисване .:
Референтни стойности. ензимната активност на кръвните клетки се открива в 12% от зрели гранулоцити и лимфоцити. В неутрофили от периферна кръв на здрави ензимна активност човешки варира между 11-72 единици. .. Т.е., ОЦК е 0,386; в limfotsitah- 25,0-28,8 единици. т. е. ОЦК е 0.286. При деца, активността на кисела фосфатаза в неутрофилите е по-висока, отколкото при възрастни.
Клиничното значение. Киселина фосфатазна активност се повишава в остра левкемия - миелоидна монобластичната и, особено в остра промиелоцитна левкемия (в дифузна форма), остра лимфобластна левкемия (в гранулирана форма). Увеличаването на ензимната активност се наблюдава в неутрофили при възпалителни процеси (остра пневмония), туберкулоза, инфаркт на миокарда, остри хирургични инфекции, злокачествени тумори. Увеличаването на ензимна активност в лимфоцити, наблюдавани при хронична ангина, при различни алергични заболявания след имунизация.
Неспецифичното естераза
Неспецифичното естераза - група от ензими (хидролази) от ниска специфичност на отцепване на естери на карбоксилни киселини с къса въглеродна верига. Локализирани в цитоплазмата на клетки, главно в лизо-Som. Активността на тези ензими в различна степен, се открива във всички типове левкоцити (максимум незрели гранулоцити и моноцити). Най-голямата активност се наблюдава в кръвни моноцити. За да се определи ензимната активност с помощта на различни субстрати (α-naftilatsetat, нафтол-AS-ацетат, нафтол-AS-D-хлорацетат и т.н.). Под влияние на неспецифичната естераза субстрат се освобождава свободна нафтол, който дава цвят оцветяване с диазониеви соли.
дехидрогеназа
Дехидрогеназа - ензими, които катализират редокс реакции, включващи две основи. Някои от тях са директно включени в процеса на биологичното окисляване, извършване на трансфер протон от субстрата, подложени на окисление до друг субстрат. Дехидрогеназа катализира като редукция, като специфичен водороден донор и акцептор към него. Дехидрогеназа присъства в голямо разнообразие от клетки и тъкани. Те са локализирани в цитоплазмата и митохондриите, могат да бъдат открити при излагане клетка cytochemically с подходящ субстрат, върху която действа дехидрогеназа в присъствието на тетразолиум съединения, които са способни да приемат протони да образуват неразтворими цветни съединения.
Референтни стойности. При здрави хора, на LDH и α-GPDH открити под формата на гранули от синьо в неутрофили, лимфоцити, тромбоцити и периферни кръвни миелобласти, гранулоцити, мегакариоцити, еритро- и нормобласти костен мозък.
CBFV LDH лимфоцити е 1.10 ± 0.05; α-GPDH - 0,80 ± 0,08. При деца, активността на LDH открит в 46% от лимфоцити. При възрастни, костен мозък точковидна в 88% от недиференцирани клетки имат ензимна активност (+), всички ядрени еритроидни клетки и гранулоцити са активни (+) или (++).
Клиничното значение. Повишена активност на LDH и α-GPDH в гранулоцити, наблюдавани при пациенти с злокачествени тумори. Намалена активност се открива в лимфоцити по време на астматични пристъпи, хронична лимфоцитна левкемия, в гранулоцити - в хронична миелоидна левкемия.
Свързани статии