Целите и методите за изолиране на чисти култури на
Чиста културата се нарича култура, която съдържа микроорганизми от един вид [7. 64].
Изолиране на чисти култури от бактерии - необходима стъпка на бактериологично изследване в лаборатория диагностицирането на инфекциозни заболявания, при изучаване на различни микробно замърсяване на околната среда и, като цяло, по всяко работа с микроорганизми [7. 64].
Материалът за изпитване (гной, слюнка, изпражнения, кръвта и други материали от пациенти, вода, почва, въздух, храна, животни и човешки трупове, вектори) обикновено съдържа микроби асоциация.
Изолиране на чиста култура ни дава възможност да изучават морфологични, културни, биохимични, антигенни и други функции, в зависимост от съвкупността от която се определя от вида и типа на членството на патогена, който се произвежда, неговото идентифициране.
За изолиране на чисти култури от микроорганизми се използват техники, които могат да бъдат разделени в няколко групи [7. 64].
Метод Пастьор - серийно разреждане на изпитваното вещество в течна хранителна среда до концентрация от една клетка в обем (историческо значение).
метод Кох ( "окабеляване плака") - серийно разреждане на изпитваното вещество в агара стопения (температура 48-50 ° С), последвано от напълване в блюдо на Петри, където агар втвърдява.
Разсаждане марки, като правило, на три или четири последното разреждане, където бактерии става ниски и в бъдеще, с растежа на петрита появяват изолирани колонии са образувани от един от оригиналния майка клетката. От изолираните колонии в дълбочината на агара са чисти култури от бактерии върху прясно засадят отново среда.
Shukevich метод - използва се за получаване на чисти култури от Proteus и други микроорганизми са "животно" растеж. Посяване на изпитвания материал за производство на кондензация на вода в долната част на наклона. Подвижни бактерии (Proteus) са в състояние да ходи нагоре по наклон култура, все още остават да расте в долната част на формата на мястото на инокулацията. Субкултивиране горните ръбове на културата може да се получи чиста култура.
Метод Drigalski - широко използвани в бактериологични практика изпитвания материал се разрежда в епруветка със стерилен физиологичен разтвор или бульон.
Една капка от първия материал се въвежда в чашата със стерилна стъклена шпатула и разпространение върху повърхността на средата. След това, по същия шпатула (не гори през него в пламъка на горелката) да направи една и съща култура във втория и третия плочи. С всеки инокулиране на бактерии на шпатула е по-малко и по-малко, и се поставят на трета чаша, бактериите се разпределят върху повърхността на културалната среда отделно един от друг.
1-7 дни. провеждане чаши в пещ (в зависимост от скоростта на растежа на микроорганизми) в третата чашата дава всяка бактерия клетъчен клон, изолиран образуващи колонии, които субкултивирани върху агар, за да се натрупват чиста култура.
Специфични възникнат затруднения при разпределението на чисти култури от облигатни анаеробни бактерии. Ако контакт с молекулен кислород не причинява незабавно смърт на клетките на културата, произведена по метода на Drygalski, но след това незабавно се поставя в чаша Анаеробна. Въпреки това, повечето от тях са метод за разплод. Същността се състои в това, че разреждане на материала се провежда в стопен и се охлажда до 45-50 ° С агарова среда.
Уверете се серийни разреждания от 6-10, след това средата, в епруветките се охлажда бързо и се излива повърхностен слой на смес от парафин и вазелин масло, за да се предотврати навлизането на въздух във вътрешността на хранителната среда. Понякога културалната среда след засяването и разбъркването се прехвърля в стерилна епруветка или капилярни Burri Pasteur пипета, чиито краища са запечатани.
Ако успешно размножаване в тръбите, тръбите Burri, Пастьор пипети анаероби растат изолирани колонии.
медии Използване култура, изяснени че изолираните колонии са ясно видими. За да се извлече изолирани колонии анаероби тръба нагрява леко въртенето в пламъка, с агар, в непосредствена близост до стените, и съдържанието на епруветката се топи като агар колона плъзга в стерилна петриева паничка. Колоната агар се нарязва със стерилни пинсети и премахване на контура на колония. Извлечените колонии бяха поставени в течна среда, благоприятни за развитието на микроорганизми разпределя (например, коте Tarotstsi среда). Агар среда издухан от тръба Burri на, преминаване на газа през набивка от памук.
Hungate метод - когато искат да се изолирани колонии от бактерии с особено висока чувствителност към кислород (строго аеробни) с използване на метода на въртяща тръби Hungate.
Към този разтопен агар среда, инокулирано с бактерии в постоянен ток чрез тръба инертен газ, освободен от примеси на кислород. След това тръбата се затваря с гумена преграда и се поставя хоризонтално в скоба, завъртане на тръбата, средата по този начин равномерно разпределени по протежение на стените на тръбата и тънкослойна втвърдява. Прилагане на тънък слой от тръба, запълнена с газова смес позволява да се получат изолирани колонии ясно видими с невъоръжено око.
Изолиране на единични клетки, използвайки микроманипулаторът. Микроманипулаторите - устройство, което позволява на микропипета или специални mikropetli премахване на една клетка от суспензията. Тази операция се контролира под микроскоп. На етап на камера влажност микроскоп определен в която лекарството се поставя "висящи капка" [7. 70].
носителите на операционни статив фиксирана микропипета (mikropetli), чието движение в зрителното поле на микроскопа прави с микрона точност благодарение на система от винтове и лостове на. Изследовател търси в микроскоп, единични клетки микропипети извлича и ги пренася в епруветки, съдържащи стерилна течна среда, за да се получи клетъчна култура.
Основният метод е бактериологичен метод, който включва отделяне на чиста култура от патоген (популация, съдържаща бактерии от един вид) и идентификация.
При идентифицирането на микроорганизми включва изучаването на техните свойства, за да се установи принадлежност към конкретна класификационна група (възраст, да кажа).
Бактериологично изследване метод е многоетапно. Поради факта, че изпитваното материал често се състои от смес от микроорганизми основа бактериологичен метод е изолиране на чиста култура на патогена, който се получава в първия етап на изследването. За тази цел, се засаждане на изпитвания материал, обикновено на твърди хранителни среди, изборът на които се определя от желаните свойства на патогена.
Приложени възможно избираем среда, която расте само за бактериални видове, или диференциална диагностика среда за диференциране предназначение патоген от други микроорганизми.
Например, за изолиране на дифтерия бацил използване telluritovye среда при бактериологично диагноза на чревни инфекции - Ендо среда, бисмут сулфит агар.
При разпределяне на опортюнистични патогени материал култури за производство на универсални хранителни среди, като кръвен агар. Всички манипулации, свързани с посев и изолиране на бактериални култури, се извършва над пламъка на горелката.
Crop материал за хранителни среди произвеждат бактериална линия или стъкло или метална шпатула, за да се диспергират в материала са бактерии върху хранителна среда повърхност, при което всяка бактериална клетка попада върху част от средата. Когато за изолиране на чиста култура от причинителят на патологичното материал главно замърсени външен микрофлора, понякога се използва биологичен метод за изолиране на чиста култура: тестов материал чувствителен към патоген Infect лабораторни животни.
Свързани статии