A61K39 / 08 - Clostridium, като Clostridium тетанус
Собствениците на патента RU 2428202:
Федералната държавна институция "Федерална Център за животните токсикология и радиационна безопасност" (FGU "FTSTRB-VNIVI") (RU)
Изобретението се отнася до областта на ветеринарната микробиология. Ваксината съдържа следните компоненти в съотношение 1 литър ваксина: Суспензията на щам клетки №28 Cl.perfringens тип А в културалната среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0 ; щам клетъчна суспензия №392 Cl.perfringens тип С в културалната среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0; щам клетъчна суспензия №213 Cl.perfringens тип А в културалната среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0; суспензионни клетки на щам E.coli KB-1, включващ антиген лепило K99 физиологичен разтвор на в концентрация от 100 -120 10 12 * 10 12 см3 - 25,0-30,0, клетките суспензия на щама E.coli PP-3 A20 антиген, съдържащ лепило на физиологичен разтвор в концентрация от 100 -120 10 12 * 10 12 см3 - 25,0-30,0; алуминиев хидроксид, 6% -s cm 3 - 200,0-250,0; формалин, cm 3 - 4.0-5.0; термолабилни и термостабилни токсоиди E.coli E.coli K99 щамове и PP-3 в съотношение 1: 1 в културална среда с титър в DSA 1: 8-1: 16, L - 1 л. Ваксината предизвиква образуването на интензивен имунитет при телета и говеда възрастни от 12 месеца в две ваксинация. В телета, получени от ваксинирани крави се генерира след получаване коластра коластрово имунитет до 1.5 месеца. Таблица 2.
Изобретението се отнася до областта на ветеринарната микробиология и биотехнология, по-специално за производството и използването на биологични агенти срещу анаеробни и enterotoxaemia esherihioznoy телешки диария.
Ehsherihiozom - ostroprotekayuschih млад инфекциозно заболяване се проявява чрез отравяне на кръвта, токсикоза и ентерит, дехидратация, увреждане на нервната система, увеличаване на депресия и слабост, а понякога пневмония и артрит. Заболяването, причинени от ентеротоксигенни щамове на Ешерихия коли (Е.коли), синтезиране на адхезионни антигени К88, K99, 987R, F41, A20, Att25. Телета повече от 80% от случаите ehsherihiozom причинени от бактерии на E.coli, производство адхезия антигени A20 и K99. За профилактика на ehsherihioza в Русия използва "поливалентна ваксина срещу колибацилоза gidrookisalyuminievaya (ehsherihioza) прасенца, телета, агнета", "Ваксина ehsherihioza селскостопанска Позволени "Coley-Wack" адхезивни съдържащи антигени K99, К88, 987R, F41, TL-, ТС-токсоиди и соматични антигени на серотипове 078, 0141. Тези ваксини са подобрени реактивност за добитък поради неговото съдържание на силно токсични щамове на Е. Е.коли, производство адхезионни антигени К88 и 987R, не причиняват заболяване при телета.
Ваксина срещу анаеробни enterotoxaemia телета в Руската федерация не е развит и произведен.
Известно е, че анаеробното ентеротоксемия в телета често проявява като смесена инфекция с ehsherihiozom. Ето защо, от действителното развитие, свързано ваксина срещу анаеробна enterotoxaemia esherihioznoy диария и телета.
Невъзможността да се използва тази ваксина за имунизация на телета е неговата тясна антигенен спектър (отсъствие на антигените на ваксината типове Cl. Перфрингенс A, D, и лепило A20 антигена E.coli, често причинява заболяване при телета), висока реактивност поради неговото съдържание на силно токсични щамове E.coli, произвеждащи адхезивни антигени К88 и 987R, не причиняват заболяване при телета.
Задачата на изобретението е да подобри имуногенен и антигенен спектъра на действие и разширяване на защитния ефект на ваксината и намаляване на неговата реактогенност.
Проблемът се решава с това, че ваксината срещу свързаната анаеробно и enterotoxaemia esherihioznoy телешки диария, съдържащ клостридиални антигени, антигени на Escherichia, инактиватор формалин и адювант на клостридиален антигени съдържа В токсин и клетки суспензия на щама №28 Cl. перфрингенс тип А, В токсин и Суспендираните клетки на щама №392 т. перфрингенс тип С, В токсин и Суспендираните клетки на щама №213 т. D антигени перфрингенс тип на Escherichia - суспензия на клетки от щам Е. коли KV-1 с лепило антиген K99 в физиологичен разтвор, клетките окачване на щам E.coli, PL-3, съдържащи лепило A20 антиген във физиологичен разтвор термолабилни и термостабилни токсоиди в култура среда, получена чрез култивиране на щамове на E.coli, KV-1 и PP-3 в културална среда на добавките на - алуминиев хидроксид гел с следното съотношение на компонентите на 1 литър ваксина:
Суспензия от щам клетки №28 Cl. перфрингенс тип А в културалната среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0.
Суспензия от щам клетки №392 Cl. перфрингенс тип С в културалната среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0.
Суспензия от щам клетки №213 Cl. перфрингенс тип D културална среда в концентрация от 3,5 10 12 -4.0 х 10 12 cm 3 - 140,0-160,0.
Окачване клетки на щам Е. коли KV-1, съдържащи лепило антиген K99 физиологичен разтвор при концентрация от 100 -120 10 12 * 10 12 см3 - 25,0-30,0.
Окачване клетки на щам Е. коли PL-3, съдържащи лепило A20 антиген във физиологичен разтвор с концентрация от 100 -120 10 12 * 10 12 см3 - 25,0-30,0.
алуминиев хидроксид, 6% -s cm 3 - 200,0-250,0.
Формалин, вижте 3 - 4.0-5.0.
TC- токсоиди и TL щамове на E.coli, KV-1 Е.коли и PP-3 в съотношение 1: 1 в културална среда с титър в DSA 1: 8-1: 16 л. - До един.
Klostridioznye антигени, получени от щамове Cl. перфрингенс №28, №392, №213, свързани съответно към серогрупи А, С и D.
Щамовете имат следните свойства. В сряда Kitty Tarotstsi бактерии произвеждат бърз растеж със силен униформа помътняване на бульон и обилна метеоризъм. В намазки от култура от бактерии са грам-положителни къси дебели пръчки с краища отрязани без противоречия. На глюкозо-кръвен агар бактерии образуват големи, гладки, изпъкнали колонии с гладки ръбове, силно непрозрачен район, заобиколен от (частичен) хемолиза. Културите са токсични, което води до унищожаване на бели мишки в рамките на 12 часа.
Esherihioznye epiteliotropnyh антигени получени от ентеротоксигенни щамове на Ешерихия коли «KB-1" и "PP-3", изолиран от тънкото черво на пациенти с диария новородени телета.
Щамовете имат следните свойства.
Морфологични свойства: полиморфни, грам-отрицателни бацили не образуват спори подредени в намазки поотделно.
Културни свойства: месо-пептон бульон щамове причиняват силна мътност, за месо-пептон форма агар сочно, лъскава, изпъкнали, гладки ръбове с гладки кръгли образуват колонии. В сряда Ендо колония малинов цвят с метален блясък.
Ензимните свойства: фермент глюкоза, лактоза, манитол, ксилоза и други въглехидрати, не втечнява желатин да образуват индол, не образува сероводород.
Серологични свойства: имат висока антигенна активност при RA, са група специфични и видово-специфични антигени, щам "KB-1" синтезира лепило K99 антиген, щам "P3-3" - лепило A20 антиген.
Включено в антигените на ваксината, свързана в ефективни количества, осигуряващи синергитичен ефект проявява с увеличаване на интензивността и продължителността на имунитет.
Пример 1 за производство klostridioznyh компоненти, свързани производствени щамове Cl ваксина. перфрингенс №28, №392, №213 отглеждани за месо-хепато-казеин среда в реактора в продължение на 5-6 часа при 37-38 ° С преди съхранение най-малко 4 милиарда / cm 3 микробни клетки. Проверка отглеждат токсичност култура на бели мишки, които имат умират след интравенозно приложение на 0.5 cm 3 на културата до 24 часа.
култура се използва за получаване на ваксина, съдържаща най-малко 6000 DLM / cm за бели мишки. Към реактора се добавя формалин до концентрация 0,7%, се поддържа на 8 дни при температура 37-38 ° С, се добавя 6% алуминиев хидроксид сто до концентрация 10%, се поддържа на 3-5 дни, и се отстранява 50% от общия обем на супернатанта течност се регулира до рН 7.2-7.4.
ПРИМЕР 2 Esherihioznye компоненти, получени от щамове на E.coli, KV-1 и P3-3, съответно, синтезиращи адхезионни антигени K99 и А20. Тези щамове причиняват смъртта на бели мишки с тегло 14-16 г в продължение на 24 часа след интраперитонеално инфекция при доза от 500 милиона МК
За Е.коли бактериалната маса се използва месо-пептон агар (за щам P3-3) и норка среда (за KB-1 щам). За тази цел, тези хранителни среди Matras излива в 300 cm 3 и се стерилизира при 0.5 атм (110 ° С) в продължение на 15 минути. След втвърдяване на засяване медии правят тези култури от 3.0 cm 10 млрд каша. Културите се инкубират при температура от 37-38 ° С След 24 часа, културите се отглеждат колонии на Е. коли промива със стерилна 0.85% воден разтвор на натриев хлорид, суспензията се получават при концентрация от 100-120000000000 МК 1 cm 3 от бактериален или оптична мътност стандарт тях GISCO. Tarasevich.
Инактивиране от формалин се извършва бактериалната суспензия. Към тази суспензия се прибавя формалин 0.5% крайна концентрация и се инкубира 4-5 дни в пещ при температура 37-38 ° С След проверка на пълнотата на инактивиране чрез поставяне на подходящи медии култура.
За всеки токсоид щам E.coli, се посяват в реактора отделно от Hottinger бульон, отглеждани 5-7 дни при 37-38 ° С TL- на концентрация, ТС-токсини дифузия реакция утаяване (RDP). Titer TL-, ТС-токсин в културалната среда трябва да бъде най-малко 1: 4-1: 8. След това се прибавя към културата до 0,4-0,5% формалин и се държи при температура 37-38 ° С в продължение на 10-12 дни, след това се добавя 6% алуминиев хидроксид сто до концентрация 10%, се поддържа в продължение на 3 дни и се отстранява 50% от общия обем на супернатантата се довежда до рН 7.2-7.4.
Пример 3. Контрол ваксина за стерилност, безвредност и имуногенна активност. За проверка на стерилността на 6 флакона всяка серия ваксина за вземане култури ВСН IPA, MPPB под минерално масло и агар Saburo 2 тръби за всяка бутилка. Култури с носители инкубират при температура от 37-38 ° С, и Saburo агар - при температура 22-23 ° С в продължение на 15 дни. В този случай, културни среди трябва да останат стерилни.
За да се провери безвредността избран 10 бели мишки от 16-18 грама телесно тегло и се прилага в доза от ваксината те 0.5 cm 3 подкожно. Ваксината се счита безвреден, ако мишката ви в продължение на 10 дни след приложение на ваксината да остане жив и клинично здрави. Контролни ваксини имуногенна активност, извършвани на 3 зайци която лекарството се прилага интрамускулно два пъти през интервал от 15 дни при доза от 4 cm 3 след 20 дни след втората инжекция на всеки заек кръвния серум титър определят антитоксични антитела Cl токсин реакция неутрализация. перфрингенс на бели мишки. Ваксините се считат активни срещу enterotoxaemia ако кръвния серум на имунизирани мишки зайци предпазва най-малко два от трите прави в експертиза, със смъртта на всички мишки в контролната група. Имуногенният активността на ваксина за тестване на Escherichia 40 бели мишки с тегло 16-18 грама 20 ваксина се прилага на мишки (експериментален) подкожно два пъти с интервал от 10 дни в доза от 0,3 cm 3 и 20 мишки (контрола) не са ваксинирани. 15 дни след второто прилагане на ваксината се прилага на животните интраперитонеално podtitrovannuyu летална доза от две контролни щамове на E.coli, (K99 и A20), като се използва за всеки щам на E.coli, 10 и 10 nevaktsinirovanngh ваксинирани животни. Ваксината се счита за активен срещу оцеляването на Е.коли Е. поне 7 от 10 ваксинирани и смърт най-малко 8 nevaktsinirovanngh бели мишки.
Пример 4. Ефикасността на ваксината се определя чрез броя на болните и мъртви чрез анаеробно и enterotoxaemia esherihioznoy диария при телета неблагоприятно икономика на тези инфекции. Производство тест на експерименталната серия свързана ваксина, проведено в SKHPK "Dzevyatouski" област Лаишево Татарстан постоянно в неравностойно положение чрез анаеробно enterotoxaemia esherihioznoy и диария. Експериментите са проведени в 46-glubokostelnyh крави и 60 телета 30-35 дневна възраст. Кравите ваксина се прилага подкожно в доза от 10 cm 3 двойно 50-60 дни преди отелване на 15-18 дни интервал. Телетата са имунизирани на възраст от 18-20 дни и два пъти с интервал от 15-18 дни в доза от 4 cm 3. В резултат на изследвания са установили, че ваксината е безвреден за животни, не предизвиква усложнения при животни и произвежда активен postvaccination имунитет. Например, в група от новородени телета, получени от ваксинирани крави, честотата е 13,1%, безопасността - 89,9%, докато в групата на телета, получени от неваксинираните крави, тези цифри са 78.8 и 77.7%, съответно. В групата на възрастните телета, ваксинирани с ваксина свързани, честотата на анаеробно ентеротоксемия esherihioznoy и диария е 8.3%, безопасността на 91,6%, докато в групата на ваксинираните телета, тези цифри са 21.9 и 73.9%. Следователно, ваксина срещу анаеробни и enterotoxaemia esherihioznoy диария на телета има достатъчно висока имуногенна активност. Нейното прилагане като профилактична мярка за трайно нефункционални икономика, която намалява честотата на новородени телета от 6.4 пъти, телета възрастните - в 2.63 пъти, като по този начин подобряване на безопасността на неонатални телета от 12,2%, телета по-възрастен - 17.7 % (вж. Таблица 2).
Пример 5. Разбиране на биологичните свойства, редът на прилагане на ваксината срещу свързаната анаеробна enterotoxaemia esherihioznoy диария и телета.
Ваксината е непрозрачна течност сламено жълт цвят с изобилие сиво утайка, която когато флакона шейкър лесно се разграждат за да се образува хомогенна суспензия.
Ваксина флакони опаковани в кутии шперплат, за да се гарантира целостта на бутилките са обвити с хартия или целулозна вата, по време на студения сезон - с памук или други изолационни материали. Във всяка кутия се инвестира 3 екземпляра. инструкции за употреба на ваксината.
Ваксината се транспортират и съхраняват в сухо и тъмно място при температура от 4 до 8 ° С срокът на годност на ваксината 12 месеца от датата на производство в съответствие с условията на транспорт и съхранение.
Ваксината с флакон нарушена цялост и се подлагат на замразяване, без етикети, наличието на примеси, и не е била консумирана в отвор на ден флакон, се изхвърля. Vybrakovannyh ваксина се подлага на кипене в продължение на 15 минути.
Активните компоненти на антигените на ваксината са бактерии Clostridium видове перфрингенс A, C, D, и Ешерихия коли K99 антигени синтезиращи лепило, A20, и техните TL- и ТС-токсоиди. Всички компоненти безвредни ваксини са силно имуногенни и напълно съвместими.
Ваксината се прилага два пъти през интервал от 18-20 дни в подходящи дози предизвиква в млад и възрастен образуване на говеда на стрес имунитет с продължителност 12 месеца. В телета, получени от ваксинирани крави се генерира след получаване коластра коластрово имунитет до 1.5 месеца.
Процедурата за прилагане на ваксината
Ваксината се използва като профилактична мярка за постоянно застрашена и домакинствата в неравностойно положение чрез анаеробно enterotoxaemia esherihioznoy диария и телета.
Ваксинацията трябва да бъде клинично здрави животни. В фермите, неблагоприятни за анаеробна и enterotoxaemia ehsherihioza, започва със специфичен превантивна имунизация на бременни крави и юници, която ваксина е в доза от 10 cm3 се инжектира подкожно два пъти за 50-60 дни преди отелване на 14-15 дни интервали. Телетата са получени от ваксинирани крави бяха ваксинирани на възраст от 18-20 дни в доза от 3 cm 3, два пъти с интервал от 14-15 дни.
Преди прилагане флаконите ваксина трябва да бъде старателно разклаща и на студено да се затопли на водна баня до 37-38 ° С
Мляко и кланици продукти, добити от ваксинирани животни, по всяко време след ваксинация осъществява без ограничения.
По време на ваксинацията е необходимо да се спазват правилата на асептика и антисептика. Поставете ваксината дезинфекцира с 70% разтвор на етанол. Спринцовки и игли се стерилизират преди употреба чрез кипене за всяко животно, като се използва единична игла.
В допълнение към ваксинацията на животните трябва да се извършва на здравни дейности, селскостопански животни, насочени към унищожаване на инфекциозен произход.
Противопоказания:
- не се ваксинират болни и немощни животни;
- да не се използва хиперимунен серум или имуносупресори в рамките на 1 месец след ваксинация.
лични мерки за предотвратяване на
Ако ваксинация е необходимо да се спазва добра лична хигиена, приети, когато се занимават с наркотици. В местата на работа трябва да бъде аптечка за осигуряване на първа помощ.
В случай на ваксини излагат откритите части на тялото, или лигавиците на очите, устата, носа, а след работа ръцете и други открити площи са се измие със сапун и вода.
Ваксината след срока на годност не е предмет на заявлението. Ваксината трябва да се съхранява на място, недостъпно за деца.