Нарастващото търсене на пробиотични препарати и храни, е наложително да се разработи нова, ефективна и евтина продукция на среди за натрупване бифидобактерии биомаса. медии производствена култура трябва да осигуряват висока степен на растежа на бактериите с минимална продължителност от им цикъл растеж да се получи висока концентрация на жизнеспособни микробни клетки на единица обем културална среда (най-малко 10 8 CFU / мл). Суровини за подготовката на тези медии трябва да бъдат достъпни, достъпни и технологично осъществими.
Бифидобактерии в първичното разпределение строги анаероби. В присъствието на въглероден диоксид може да бъде толерантни към кислород. В лабораторни култивиране на тези микроорганизми придобиват способността да растат в присъствието на едно количество кислород, и по-висока хранителна медии - да растат в напълно аеробни условия. Чувствителност към кислород, много щамове бифидобактерии варират, поради разлики в механизма на ферментация.
Възпроизвеждането на бифидобактерии се дължи на огромно количество фактори на растежа. Много видове изискват биотин, пантотенова киселина, цистеин, рибофлавин, пуринови и пиримидинови бази, пептиди, аминозахари, коензим А, олигозахариди, някои ненаситени мастни киселини, и други. Някои щамове изискват въглероден диоксид, амоняк, хистидин. От аминокиселините изисква лизин, пролин, серин, аланин, аспарагинова и глутаминова киселина.
В синтетична среда за растеж бифидобактерии изисква желязо, магнезий, фосфат, калиев и натриев хлориди, в някои случаи - манган.
Bifidobacteria се отглеждат, създавайки анаеробни условия или понижаване на редокси потенциал на средата, в мляко, хидролизиран млечен хидролизат и казеин, както и чернодробна бульон, допълнен с вещества растеж (дрожди автолизат, царевичен мацерат, цистеин, и т.н.). На гъста хранителни среди бифидобактерии образуват различни колония плоски, полусферична, лъскава, стегнат, с наклон, има по-тъмен център и т.н. Цветът на колонии варира от бяло и сиво до тъмно кафяво. Колониите често наподобяват форма на зърно елда или пресечен триъгълна пирамида, някои медийни колонии са оформени като леща.
В момента, за натрупването на Bifidobacterium longum, използването на биомаса хранителни среди с различен състав. Обслужен хидролизати и екстракти от растителен или животински произход: Blaurock среда на базата на черен дроб бульон, царевица базирани среда лактаза царевичен екстракт среда на базата на получения екстракт от месо.
За култивирането на бифидобактерии смятан хепато-цистеин среда (Blaurock сряда).
За да се подготви сряда Blaurock 500 грам говежди черен дроб, освободена от сухожилията, кайма, изсипва двойно количество вода и се нагрява под обратен хладник в продължение на 2 часа, след това се филтрува. Филтратът се регулира с дестилирана вода до 1 000 cm и се състои от 10 г пептон, 10 г лактоза, 100 мг цистеин хлорид пет грама и агар NaS1 1-2 от рН 6.8-7.0. Все пак това е един скъп среда, съдържаща оскъдни компоненти за тях малко по-подходящи за използване в промишлени среди.
В млечната промишленост за култивиране Bifidobacterium препоръчва хидролизат и мляко среда - GM среда, съдържаща хидролизат адресирано, натриев хлорид, лактоза, L-цистеин хидрохлорид, пептон, агар-агар и вода. Хидролизат и мляко хранителна среда, се получава както следва:
Получаване на хидролизиран млечен. Нормално или намалено съдържание на мазнини мляко (обезмаслено мляко) се довежда до кипене и се вари в продължение на 2 минути, охлажда се до 14оС, регулира рН 7,9 10-20% разтвор на NaOH.
Панкреатин се добавя в размер на 1 г / дм 3 предварително разтворени в малко количество се загрява до 44 ° С вода, разбърква се и се поставят в термостат при 40 ° С в набивка от памук. По време на първите два часа разбъркване и коригиране на рН до 7.9 се провежда на всеки 30 минути, в следващите два часа след всеки час. След 4 часа от началото на хидролиза се добавят 1-2% хлороформ, затваря с гумена запушалка и се поставят в термостат. След 4 часа рН се довежда до 4.4 30% разтвор на оцетна киселина, се нагрява, при разбъркване, в продължение на поне 15 минути, филтрува се през филтърна хартия. Готов хидролизат трябва да съдържа 200-300 мг /% от амино азот, прозрачни, реакция на неутрална или слабо кисела му.
Получаване на хидролизат, мляко среда. Хидролизиран млечен разрежда с питейна вода в съотношение 1: 1. Малко количество разредена хидролизат разтопен агар в количество от 2,5 г на 1 дм 3 среда. Останалата сума на хидролизата се прибавя 28 г пептон и 3,5 г натриев хлорид, сместа се загрява до температура от 80 ° С, и след това се смесва с агар стопения. Сместа се довежда до рН 7,5, нагрява под обратен хладник в продължение на 15 минути, оставя се да се утаи, декантира от утайката, не филтруване, съставена от гореща дестилирана вода до предварително определен обем и прибавя 10.0 грама лактоза, и 0.15 г хидрохлорид цистеин. Сряда излива в тръби 10 см колона 3 и стерилизират при 112 ° С в продължение на 30 минути, с подгряване с пара в автоклав в продължение на 30 минути. рН 7,1-7,3 завършена среда.
Хидролизат, мляко среда се използва широко в Украйна и други страни от ОНД за увеличаване на биомасата на бифидобактерии. Тази среда осигурява бифидобактерии в концентрация от 10 8 до 10 9 CFU / мл. Това е доста лесна за производство. Въпреки това, GMR има няколко недостатъка. Основната от тях - бавен растеж на бифидобактерии. По този начин, когато се отглежда в тази среда бифидобактерии достига максимална концентрация след култивиране 18-24 часа.
За изолиране и отглеждане на Enterococcus faecium има редица селективна среда :. основа кръвен агар азид azidodekstrozny бульон, KF-стрептококов агар, М-агар ентерококи стрептококов селективен агар и т.н. На кръвен агар колония ентерококи малък, кремаво или бяло, гладка гладък ръб, се различават по вида на хемолиза. Този щам - хомоферментация, газ не образува крайния продукт на ферментация на глюкоза и други въглехидрати - млечна киселина. В ентерококи изразен redutsiruya свойства: те се обезцветява и метиленово синьо лакмус мляко, reducyruut нитрати в нитрити.
За култивирането на Enterococcus faecium използвани азид-глюкоза бульон. Хранителната среда е предназначена за изолиране и култивиране на ентерококи, изолирани от изпитвания материал. Средата е селективна и осигурява преференциално растеж на ентерококи. Азид-глюкоза бульон се получава както следва: Получаване на ВСН. 500 г ситно нарязан прясно обезкостено месо, мазнина и сухожилие излива в емайла тиган един литър питейна вода, загрята до 50 ° С и се оставя да се влеят в продължение на 12 часа при стайна температура и 1 час при 50-55 ° С Месо притиснат, екстрактът се филтрува през марля със слой от вата, варени в продължение на 30 минути за коагулация на колоидни протеини и се филтрува два пъти (за първи път през памучна марля, а вторият - през филтърна хартия). Филтър долива с вода до 1 L, излива се в колбата, запечатани с памучни запушалки и се стерилизира при 120 ° С в продължение на 20 минути (колби тръба затворен отгоре капачките на хартията). Тапи за уши трябва да бъдат твърди, защото те са филтър предотвратяване проникването на бактерии от въздуха след стерилизацията. бульон месо може да се използва по всяко време за приготвяне на съответната медия. Ако те са готови да се борят, преди стерилизация не е необходимо. Ако е желателно да има много висока месо бульон хранителни вещества по време на инфузията месо се допълва с вода и се подкиселява слабо пепсин бульон със солна киселина. Пепсин допълнително хидролизира протеинов месо съединение и количеството на абсорбция на хранителни вещества от бактерии нараства. Месо може да замени екстракт месо, го приема до 5 г на 1 литър среда.
За получаване на ВСН до 1 L бульон се прибавя 5,10 грама на пептон (пептон - първи протеин хидролиза продукт с високо молекулно тегло), за да се увеличи калорийното съдържание на средата, и 5 г натриев хлорид, за да се създаде осмотична активност. Средата се нагрява до разтваряне на пептон, като се разбърква непрекъснато. След установяване на неутрален или леко алкална реакционна среда, добавяне на 20% разтвор на Na2CO3 (синка за пране на мокро лакмусова хартия червено, повече фенолфталеина показва алкална - това добавяне към средата на цвят порцеланова чиния розово изглежда). Удобен за използване индикатор bromtimolblau. 1-2 капки, които дават със стъклена пръчка в порцеланова чиния и бульон се добавят капка. В неутрална среда bromtimolblau тъмнозелен в кисела - жълт, алкална - синьо. След определяне на реакционната среда е отново 5-10 минути и се нагряват нагънати протеини чрез промяна на реакционната смес се филтрува през филтърна хартия без изясняване бульон или изяснени си протеин. Прозрачен ВСН дозира във флакони, затворени с тапи от памук и се стерилизира при 120 ° С в продължение на 20 минути.
Получаването на бульон азид-глюкоза. До 1 дм 3 ВСН прибавя 5,0 г пептон, 7,5 грама глюкоза, 2,5 г натриев хлорид, компонентите се разтварят чрез нагряване. След това се охлажда и рН се нагласява така, че след стерилизация при 25 ° С е (7,2 ± 0,1). След това, основната среда се стерилизира чрез преминаващ пара (при 100 ° С) в продължение на 30 минути. основа среда се охлажда до 50 ° С, се прибавя 2,0 cm3 на натриев азид и 2,0 cm 3 разтвор на бромкрезол лилаво. Подготвената среда не се стерилизира. Сряда съхранява на тъмно и сухо място при (4 ± 2) ° С не повече от 3 месеца. Непосредствено преди употреба, тя се излива в 5 cm 3 в стерилни епруветки.
Така бифидобактерии и ентерококи, заедно с други членове на нормалната чревна микрофлора, работи и регулира много функции на тялото. В процеса на живот, те образуват органични киселини, което води до създаването на нормалната чревна среда за инхибиране на пролиферация на патогенни, гнилостните и обгазяване чревната микрофлора. Улеснява процеса на ензимно разграждане на храни, като повишаване на хидролиза на протеини, ферментиращи въглехидрати, мазнини omilyuyut, разтваря влакна, стимулират перисталтиката, улесняване на гладкото евакуацията на чревни съдържание.
Bifidobacterium longum, АТСС 15707 се култивира в индустрията, създавайки анаеробни условия или понижаване на редокси потенциал на средата, в хидролизиран млякото. За култивирането на Enterococcus faecium SF68 използва азид-глюкоза бульон. Хранителната среда е предназначена за изолиране и култивиране на ентерококи, изолирани от изпитвания материал. Средата е селективна и осигурява преференциално растеж на ентерококи.