Предпоставка за добри хистологични секции е правилният избор на ъгъла на ъгъла на перката и рязане.

В ъгъл на наклон разбере ъгъл, образуван от долната повърхност на перката с равнината на рязане. Най-добрият счита ъгъл на наклон, при която заточване на острието равнина е успоредна на горната повърхност на блока. Обикновено това е. Ако нож е монтиран така, че ъгълът на наклона на по-голяма оптимално, частта ще се разпадне, ако по-малко - рязане не е възможно, тъй като само острието ще се плъзга по повърхността на блока.

Чрез ъгъла на рязане се означава ъгълът между надлъжната ос на ножа и въображаемата линия, простираща се през центъра на единица, успоредна на движението на шейната провеждане ножа. Големината на ъгъла на рязане зависи от свойствата на третирания материал: тя е по-мек от ъгълът е по-малък, и обратно, по-трудно, ъгълът е по-голяма. Когато косо разположение нож намалява съпротивлението му инцизалния повърхност на блока, което улеснява рязането на меките блокове.

Рязане на микротом

За да се намали може да се изследва под микроскоп, е необходимо, че структурните компоненти на неговите съставни тъкани са ясно различими при преминаваща светлина и че парче е защитен от потенциално замърсяване и повреждане. Ето защо, по-нататъшно намаляване на неговата обработка включва боядисване, избелване и заключение.

Блокът се подлага на почистване чрез премахване на свободно чист парафин (т. Е. тъкан се намира). От двете страни на блока са останали само под формата на слой материал. Ако не произвеждат като отстраняване на парафин, секциите няма да бъдат гладки и набръчкани (изпъкнал) в средата, поради това, че чист парафин останалите страни се намалява, докато рязане в по-голяма степен в сравнение с парафин импрегниране на тъканта.

Неприятен момент бръчки секции могат да бъдат намалени чрез подлагане на блок охлаждане (ледена), напр. Го дава по-голяма твърдост.

Подготовка на парафин блок да намали, ако е необходимо, да получат ленти трябва да се стреми да я дам правилното правоъгълна форма. блок парафин е здраво фиксирана в микротом затягащата разположени успоредно dlinniku микротом. След това, чрез задаване на желания ъгъл на рязане и правилен ъгъл на наклона на ножа, той е твърдо фиксирана с винтове и скоби, поставени под уреда. Когато строго напречна позиция на ножа много гъста обект го вибрира, която е придружена с характерна и нулата образуване на напречни ивици върху повърхността на блок.

След това, регулиращ винт фидер уредът е настроен така, че горната му самолет бил преди ножа острието 0,5-1 мм. Когато предварително напасване към блока на ножа е завършен е настроен микрометрично мащаб за дебели секции (25-30 микрона) и нож движение шейна започне дозиране единица нагоре с него, докато първите пълни раздели. След получаване на симулация блок: се реже със скалпел излишък парафин, оставяйки актьорския около обекта слой е не повече от 3.2 mm, и приложете единица правоъгълна форма. След микрометрични мащаб довежда до желаната дебелина парче и се пристъпи към окончателно отрязване материал.

Трябва да се помни, че движението на нож слайда по пистата трябва да става постепенно, без излишно усилие. Невъзможно е да натисне надолу горната част на дръжката, тъй като извършва до изместване на масления слой, разположен между плъзгащите се повърхности, и понижаване на острието, като секциите не са гладки. Микротомни движение нож по време на преминаването на устройството трябва да се извършва бързо.

Правилно добави малки парчета на органи и тъкани при оптимална температура в стаята е добър режим нарязани и нарязани, обикновено попада на ножа в изправи състояние (прав ъгъл рязане). При рязане на големи блокове от твърд материал и секции често са навита. Все пак, това може да бъде избегнато чрез залепване и повдигане на четката нарязани за рязане на ръба по време на процеса на рязане. Срещу усукване секции и помага намаляване дебелината им. Наклонената позицията на секциите на ножове са единични, но рязане реже по-лесно и съкращения са по-прикрити.

Тъй като парафин силно tupit ножове за рязане на парафинови блокове е по-добре да се използват твърди закаляване ножове с дебел клин.

Дебелина на резена парафин варира от 3.5 до 15 микрометра, и то зависи както от качеството на материала за напълване и ножа.

Трябва да се уверите, че кройката не е закован на острието, както е в този случай, е неговата адхезия и щети. Готов парче внимателно се отстранява с острие мокра четка (в посока от гърба на острието) и се прехвърля в съд с топла (350-400S) вода. Секции се поставят на повърхността на водата се изисква, е свързана с нож, който може да се определи характеристика гланц (горната страна винаги мат).

При рязане, е необходимо да се уверите, че космите на четката не подлежат на острието на ножа, тъй като това ще повреди на острието.

За залепване изправените части от риба на сухо върху подготвена предметно стъкло; към тази стъкло в единия край се потапя в чаша с вода, се извършва при срязване и го вземете, докато дисекция игла върху средната част на стъклото. Остатъчната вода се отстранява внимателно около кърпа рязане е изгладена и пръст чрез 2-3 слоя суха и топла кърпа.

Тъй като парафинови срези на етикета абсорбират вода, за да се избегне объркване по време на по-нататъшна обработка (т.е.. Д. Color), те трябва да са напълно сухи, само тогава да започнете да рисувате.

Недостатъчно сушени резени лесно идват разлепи по време на рисуване, и най-важното е, че лошо освободени от обработката на парафин с ксилен. Критерият е добре изсушени резени са по-голяма прозрачност на придобиването, в сравнение с белезникави лош удар сушени резени.

Ако трябва да побързат с цвета, се препоръчва svezheprikleennye и малко пресъхна (във фурната или във въздуха) намалява леко podogrevet платформа уред, внимателно с което восъкът да началните признаци на топене, но не се стопи напълно. Такава обработка улеснява по-силна фиксация секции на стъкло.

За да се раздели здраво закрепен към слайда, а не обели по време на боядисване, стъкло, специално обработен за обезмасляване. За тази цел, те се промиват обилно с топла сапунена вода или продължително възпаление 2-3% разтвор на сода, след това се промива добре с чиста вода и се промива с топла (няколко часа) в поток.

Третираната което се изплаква с вода, слайдовете се избърсват с кърпа бельо, притежаващи ръбовете на стъкло; 960 и се съхраняват в смеси алкохол или етер алкохол, където те се отстраняват, както е необходимо форцепс и се сушат. Най-добре обезмаслено пързалка водата трябва да се разпространи тънко и да не се събира в капчицата.

Добри пързалки трябва да бъдат изработени от бяло стъкло и имат напълно плоска повърхност, дебелината им не трябва да надвишава 1.2 mm.

Преди филийки етикета суши стъклото на покрити с тънък слой на протеинова смес с глицерол.

Получаване на протеин с глицерол. Обърнете прясно яйчен белтък (яйчен жълтък без примес), се разбива с вилица или шпатула до състояние пяна и се изсипва в голям shirokoporisty филтър, предварително накисната в дестилирана вода. Филтриране продължава около 24 часа. Към филтрува протеин се добавя равен обем от глицерол, разбърква се и се добавя парче тимол за предотвратяване на гниене.

Получаване на плъзгача с протеина. Суха пързалка стъклена пръчка малки капчици се прилага протеинова смес с глицерол и пръст внимателно намазка тънък слой. Ръцете трябва да бъдат предварително измити и пръст размазване, които произвеждат смес, третира се с алкохол. Увреждане на стъклен слой протеин с глицерол подвижния с умерено загряване (50-600), за който стъклото се извършва 2-3 пъти над котлони. След тази обработка се счита слайда, за да бъде готов и той може да бъде поставен секции.

Възможни грешки при производството на парафинови срези

За да се получи добро хистологични проби, трябва да бъде в състояние своевременно да идентифицират и елиминират причината, намалява качеството на съкращения.

а) Разрезът се разпада.

1) парафин

2) ниска температура на околната среда

3) бавно охлаждане на отливката восък

4) голям ъгъл на наклона на ножа

1) запълващ материал в мек парафин след предварително стопилка блок в термостат

2) дишане по повърхността на блок (rewarming) преди всяко движение на ножа или адаптиране напр. плоча до микротом

3) промяна на ъгъла на наклона на ножа.

б) материал гласове в процеса на рязане пада от заобикалящата масата на парафин.

1) при прехвърляне на парче в калъп за леене се охлажда.

1) е необходимо да се стопи блок инкубатора и повторно запълване, стриктно спазване на правилото за пълнене, след предварително материал на топене се прехвърля в междинните участъци (за отстраняване на алкохол), след това импрегнирани отново и се излива

2) Напълнете охлажда произведени парафин

3) недостатъчно отстраняване на алкохол преди импрегниране.

в) равнината на разреза е неравномерно, материалът е слабо нарязани нарязани или не, ножът скокове над повърхността на блока.

1) при окабеляване умора на материала и фиксатор.

Невъзможно. Възможно е да се омекоти материал само няколко, ако рязане на повърхността пред всяко движение лопатка да се прилага слой от горещо четка восък (придава след това се охлажда) или диша на повърхността на блока.

ж) секции са усукани, се придържат към смачка острие повърхност.

1) малък ъгъл на наклон на ножа

2) мек парафин

3) високи температури на околната среда.

1) променя ъгъла на наклон

2) запълни материал в твърд парафин блок и се охлажда чрез поставяне в хладилник преди рязане (може да се постави на режещата повърхност на парче лед)

3) свързване, набръчкване или разкъсване на части, особено при рязане органи богата на костите, сухожилията и плътна съединителна тъкан, може да се дължи на тяхната електрифициране.

пуснат на острието (при преминаване на границата) капка вода, и диша на блока с ножчета, част острие и триене на съседната част на ножа парче парафин.

д) Секциите са скъсани или покрити с бразди.

1) чеп на режещото острие

2) мръсно парафин (плътен нулата нарязани сламката и развалят острието);

3) слабо калцият се отнема материал.

1) и изправяне точка нож или нож носител движение в

2) perezalivke в чист парафин

3) не могат да бъдат елиминирани.

ж) парче равнина не е еднаква (белезникав в средната част).

Топене и задържане блок от материал чрез междинните секции на абсолютен алкохол. След обезводняване се извършва чрез междинен носител се импрегнира и вграден.