Цел: Да се запознаят с метода за определяне на изоелектричната точка (IEP) на протеина.
КРАТКО теоретично въвеждане.
На повърхността на частиците на дисперсната фаза по време на контакт с течността спонтанно възниква и излишъкът от електрически заряд образува potentsialobrazuyuschy слой на йони. Към твърдата повърхност на течната среда са привлечени йони са противоположни по знак potentsialobrazuyuschego слой. Те са наречени неутрализиращи. Има електрически двоен слой (EDL). Това може да се разглежда като вид кондензатор, вътрешната плоча, която се образува от един слой potentsialobrazuyuschego йони и външен - от противойони. На противойони са в две положения: един от тях представлява адсорбция слой, а другият е в дифузия слой.
Потенциалът на повърхността на колоидни частици, наречени електрокинетично или # 950; (Zeta) -potential. В електрокинетично потенциал числено равно на работата, която е необходимо да се направи при прехвърлянето на зареждане от повърхността във вътрешността на уреда пелети от среда дисперсия или обратно.
Точката, в която зета потенциал е нула се нарича изоелектричната точка. В този момент, има пълно обезщетение potentsialobrazuyuschego контра-слой, т.е. всички potivoiony ще бъде в адсорбция слой.
В тази лаборатория, трябва да се определи изоелектричната точка на протеина.
Общата формула на протеиновата молекула може да се запише, както следва:
R- въглеводороден радикал,
NH2 - амино група, която има основни свойства, защото в кисела среда добавя протонен да образува йон NH3 +,
НООС-киселинна група, която дисоциира в водородни йони Н + и киселинен остатък - СОО -.
В кисела среда на частицата на протеин колоиден има положителен заряд:
и в алкална среда - отрицателен заряд:
Протеини макромолекули състояние, при което броят на групите йонизираните киселина йонизирани равен на броя на основните групи и следователно средно общия заряд е нула макромолекули наречени изоелектрично състояние. РН на която протеинови молекули са в изоелектричната състояние се нарича изоелектричната точка (PI). Изоелектричната точка на протеина е важна характеристика определяне свойствата си в определена среда.
Изоелектричната точка се определя за казеин или желатин.
При стриване протеин (казеин или желатин) в хаван до прахообразно състояние. Колбата се поставя в 100 мл 0.4 грама протеин, 10 мл 1N разтвор на натриев ацетат и 70 мл вода. Колбата се нагрява до 70 ° С с енергично разклащане разтваря протеин. След това се добавя вода до марката. Разтворът може да бъде леко мътен, но не трябва да съдържат флокули и утаяване.
Чашата 7 съгласно техните номера (вж. Таблица 6) се излива вода и оцетна киселина. След това, всяка стъкленица се прибавя 5 мл колоиден разтвор на протеина и след 10 минути марка, в която е настъпило коагулация решения.
Таблица 6. Определяне на протеин PI.
В "Забележки" колона е написано: ". Най-утайката" "Не коагулационни", "замъглено", "утайка",
РН на всички разтвори се измерва с рН-метър.
хартия, използвана джоба рН метър PICCOLO-рН метър HANNA производствена компания. Това рН метър има маса от 100 г, и се захранва от батерии. Системата за електрод на устройството комбинира рН електрод, референтен електрод, термичен сензор и усилвател. Такава система намалява влиянието на влага, мръсотия, и шум на точността на измерване на рН. PICCOLO дава почти толкова точни показания като стационарни рН-метър (± 0,02 рН). Автоматична температурна компенсация от вграден сензор за температура и микропроцесора PICCOLO, автоматично компенсира ефекта на температура в диапазона от 0 до 70 ° С, което осигурява висока точност на измерване на рН.
След удължено съхранение, рН метър се накисва в - HI 70300L разтвор или буферен разтвор с рН 7.01 в продължение на 4 часа. След това, калибриране на две точка на инструмента. За да направите това:
1) изплакване електрод с дейонизирана вода, след това буфер HI7007;
2) да се потопи електрода (фигура 7), за да разтвор HI буферния 7007;
3) включване на уреда (ключ "ON / OFF"
(1, Фиг.7), и с помощта на винт калибриране "рН 7" настроен на rN7,01 показания;
4) Изплакнете електрод с дейонизирана вода, след това буфер HI7004;
5) да се потопи електрода в буферен разтвор и регулиране HI7004 винт отвертка "рН 4" - докато индикаторът показва рН 4.01 (при 25 ° С). Изключете уреда чрез ON / OFF превключвател (1 на фигура 7).
Докладът посочва каква стойност съответства на изоелектричната точка рН на изследвания белтък.
1. обясни механизма на образуване на електрически двоен слой на повърхността на диспергираните частици.
2. Какво се нарича електрокинеза потенциал?
3. Име на електрокинеза явления в дисперсни системи и да обясни какво се дължат.
4. Как мога да определя зета потенциал?
5. Какво се нарича изоелектричната точка на протеина? Схематично формула на протеинови макромолекули, присъстващи в изоелектричната състояние.
Лабораторни упражнения №9.