Калус тъкан - тип клетъчна диференциация осъществява чрез дезорганизиран пролиферация на дедиференцирани растителни клетки, органи. Растенията в естеството на калус тъкан се среща в изключителни случаи (например травма) и работи за кратко време. Тази тъкан предпазва място раняването, могат да се натрупват хранителни вещества за регенериране анатомични или възстановяване на изгубеното орган.
формация Колъс не винаги е свързано с травматично въздействие. Калус може да възникне в резултат на вътрешната пролиферация тъкан експлант без оглед на крайната повърхност поради хормоналния баланс. Отглеждане мазол тъканни слоеве се разпада и се развива на повърхността. поставен върху изкуствена среда, съдържаща ауксини, тръби, колби, петриево блюдо (ин витро) на корени, листа, стъбла, прашници, ембриони (експланти) - за фрагменти на тъкани от различни органи на висши растения култивирани калусни клетки.
Един от основните хормони, използвани при култивирани ин витро, са ауксини, които активират клетъчно делене и удължение. Проникване в клетки, индолоцетна киселина се свързва със специфични рецептори, които засягат функционалната активност на мембрани, рибозоми и функционирането на ядрено устройство. Както се използва ауксини 2,4-дихлорфеноксиоцетна киселина (2,4-D), нафтилоцетна киселина (NAA), индол-маслена киселина (IBA), индолоцетна киселина (IAA) при концентрация от 0.5 - 10 мг / л, в зависимост типа на присадка.
Процесът се предхожда от образуването на калус тъкан експлант дедиференциация. Ако диференцирането на тъканите губят структура, характерни за техните специфични функции в растенията, и се връща в състоянието на делящите се клетки. Ако експлант използва за производство на калус, фрагмент орган, който се състои от епидермални клетки, на сърцевината клетки на съдовата система, ядрото и първичен кортикална паренхим. За предпочитане, клетките пролиферират камбий, кора паренхим ядро.
Клетките в култура, могат да съществуват в две форми: в суспензия в течна среда и върху повърхността на твърда хранителна среда, за да се образува калус. култивиране на повърхността се извършва на твърд агар среда.
Калус тъкан се отглежда процеса на повърхността е аморфна маса на тънкостенни паренхимни клетки, които нямат точно определена анатомична структура. Цветът на масата може да бъде бяло, жълто, зелено, червено. В зависимост от произхода и условията на отглеждане, новообразувана тъкан са:
- ронливи, много хидратация, лесно да се раздели на отделни клетки;
- средна плътност, с добре дефинирани меристематични центрове;
- плътен, със зони с намалена камбий и съдова. Като правило, дългосрочно култивиране в среда, съдържаща ауксини, калусни тъкани губят пигментация и се разхлаби.
В цикъл на отглеждане на мазол тъканни клетки след серия от разделения започват да се увеличи напрежението, като зрял диференциран мазол тъкан и развалени. За да не се случи на стареене, загуба на способността да се разделят и по-нататъшно растеж, както и отмирането на израстъци клетки, основно мазол се прехвърля в прясна среда, след 28 - 30 дни, т.е., прекарват пасажи и субкултура на мазол тъкан.
Появата на физиологични и структурни различия между клетките и тъканите на растенията, поради тяхната функционална специализация се нарича процес диференциация. Понятието "диференциация" отразява преобразуването на ембрионални клетки в меристематични специализирани. Меристематични клетки от същия тип на структура и функция, започват да се развиват по различни начини, създаване на различни тъкани на органи.
Суспензионни култури - са единични клетки, малки, средни и големи агрегати (група от клетки), отгледани в течна хранителна среда при постоянна аерация (кислород) при асептични условия. Суспензиите получени от мазоли. За започване на суспензионна култура трябва да бъде 2-3 грам свежо тегло на инертни калусни клетки от 60-100 мл течна среда. Първично култивирани в колби суспензия с течна среда в ротационен шейкър при скорост от около 100-120. / Мин.
Суспензионни култури са широко използвани като моделни системи за изследване на вторичните метаболитни пътища, ензими и индуциране на генната експресия, разграждане на чужди съединения, цитологични изследвания и други.
Окачване модел крива растеж е S-форма и се състои от фаза закъснение, експоненциална фаза, стационарна фаза и разграждане. Формата на кривите на недвижими растеж различни фази трайни. Това зависи от генетиката на населението, размера на инокулант и растеж състава на средата. Скоростта на растеж на биомасата варира от 15 до 70 дни.
Суспензии, използвани за важни химически вещества, органични киселини, ензими, алкалоиди, пигменти, протеини, аминокиселини, се използват във фармацията, козметиката, храна и химическата промишленост и селското стопанство.
Суспензионни култури са от голямо значение за генетика и молекулярна биология, по-специално: на суспензията клетки са протопласти, необходими за соматична хибридизация, генното инженерство, както и за изследване на клетъчния метаболизъм.
Култивирането растителни клетки в течна хранителна среда, при постоянно разбъркване липсва много от недостатъците, присъщи на култивиране на клетки на калус агар твърда среда. Постоянно движение на растителни клетки в течна среда улеснява обмен газ, градиент хранителен решава проблеми и полярност на клетъчния растеж. Повечето суспензионни култури могат да бъдат получени чрез прехвърляне калусни парчета в насипно състояние в разбъркан течна среда със същия състав като средата на която се отглежда калуса. За всяка линия на суспензионни клетки култура има минимално количество инокулум (брой клетки преминават), с по-малко количество, което не расте суспензионни клетки култура. С намаляването на размера на инокулума увеличава продължителността на латентната фаза. Суспензионна култура на растителни клетки са широко използвани като моделни системи за изследване на вторичните метаболитни пътища, ензими и индуциране на генната експресия, както и на изходния материал за изолиране на ензими. Важно предимство на разпределението на ензими или вторични метаболитни продукти е липсата на по-голямата част от суспензията културални клетки на хлорофил и каротиноидни пигменти. Поради факта, че клетките суспензия култура се състои главно от относително хомогенна популация от клетки, които могат бързо да бъдат обработени с добавени химически вещества културална среда, те са много полезни за биохимични експерименти, проведени в изследването на метаболизма uvodimyh вещества, както и за изолиране и охарактеризиране на мутантите.
Микроразмножаване тръба растения се извършва с помощта на размножаване. Това възпроизвеждане се основава на потискане на апикалната активиране доминиране и аксиларните меристеми чрез отстраняване на стреля върха. От аксиларни пъпки се образуват издънки на хранителни среди. Растенията, които образуват 5-6 листа, асептично отстраняват от епруветките и нарязани на части (стволови нарязани с листа и пъпки). Филизи се засаждат на дълбочина от пролуки в културалната среда без хормони, или с добавяне на ауксиновия.
Филизи се култивират при същите условия като меристем при температура от 24-25 ° С през деня и 19-20 ° С през нощта осветление KLX 5-6 и шестнадесет часа фотопериод.
Растежът на стъблото и корените започват 3-4 дни след засаждане на хранителна среда, и растението е напълно оформени в 12-15 дни.
Всички последващи резници се извършва в 14-20 дни. От един завод може да получи 5-8 издънки, а след 2-3 месеца - 3-5 хиляди изрезки ..
В долната част на растението се използва за ELISA. Растения, заразени с вируси, брак, и да доведе до здравословна meriklonam (меристемата клонинги).
Вкореняване растения, образувани от mikrocherenkovanii, те трябва да бъдат трансплантирани в нова хранителна среда. Филизи и издънки лесно корен върху среда, съдържаща минерални соли дефицит състав (White среда Murashige-Skoog среда разрежда два пъти), или среда, допълнена с ауксини: IAA, NAA, IBA.
Издънките образувани в тръбите с медиите могат да се разглеждат като вкоренени малки растения, които трябва да бъдат адаптирани към конвенционални условия на растеж. Такива растения са най-трансплантирани в земята, когато напълно оформени 5-6 листа и корени ще растат достатъчно. Въпреки това, различните видове култури по различни начини, за да се адаптират към променящите се условия на околната среда. Всяко растение изисква специално подбрани условия на култивиране в почвата, който се определя експериментално.
Свързани статии