В повечето вирусни инфекции се развиват имунни реакции, използвани за диагностика. Клетъчната реакция обикновено се оценява в тестове за цитотоксичност на лимфоцити срещу инфекциозни агенти или техни инфектирани целеви клетки или способността на лимфоцитите да отговори на различни митогени и хипертония.
В практическата лаборатория тежестта на клетъчни реакции рядко определена. По-често срещаните методи за идентификация намерени антивирусна AT.
РН се основава на подтискането на цитопатогенен ефект на вируса след смесване със специфичен АТ. Файл вирус смесва с известните търговски антисеруми след подходящо инкубиране и се въвежда в клетъчния монослой. Липсата на клетъчна смърт показва несъответствие на инфекциозен агент и известни АТ.
Сред другите тестове най-широко намерено реакцията директна имунофлуоресценция (най-бърз, чувствителен и възпроизводим). Например, идентифицирането на CMV СРЕ изисква най-малко 2-3 седмици, и използването на белязано моноклонално AT идентификация е възможно в рамките на 24 часа. По такъв набор от реагенти, те могат да се прилагат в култура, инфектирани с вируса, се инкубира, промива се несвързаната реагент и изследват чрез флуоресцентна микроскопия (флуоресценция позволява да се открие присъствието на инфектирани клетки).
Имуноелектронна микроскопия (аналог предишния метод) ви позволява да се идентифицират различните видове вируси, открити чрез електронна микроскопия (например, различни видове херпес вируси), които не могат да бъдат направени въз основа на морфологични белези. Вместо антисеруми да се идентифицират различни начини, като използвате етикетирани, но трудността и високата цена на метода ограничава прилагането му.
Идентификация на антивирусни антитела (АТ) в кръвния серум. HAI. РСК. RIF.
Immunosorbtsionnye методи за идентифициране на антивирусни антитела.
По-прост и достъпен подход - откриване на антивирусни антитела (АТ) в серума. Кръвните проби трябва да бъдат избрани два пъти, веднага след появата на клиничните признаци и 2
3 седмици. Изключително важно е да се разгледат само две от серумната проба. Резултатите от едно изследване не може да се считат за окончателни, поради невъзможността да се свърже появата на AT с настоящото дело. Възможно е, че те се движат AT след предишна инфекция. В тази ситуация, ролята на серумни изследвания, получени в периода на възстановяване след боледуване, е трудно да се надценяват. В присъствието на заболяване в периода на селекция на първата проба показва поне четирикратно увеличение в титъра AT, идентифицирани по време на пробите второто проучване.
Методите описани по-долу не позволяват да се разграничат антитяло (АТ), образувана по време на заболяването след възстановяване и циркулиращ (продължителността на този период е различна за различни инфекции). Както е разгледано в острата фаза и е необходимо Второто адекватна диагноза да потвърди значително увеличение на AT заглавия в две проби, първата проба - в периода възстановяване (2-3 седмици). Получените резултати са ретроспективни в природата и са по-подходящи за епидемиологични проучвания. HIT разкрива АТ, синтезираният анти-хемаглутинин (например грипен вирус).
Методът позволява лесно да се открият такива антитела (АТ) в серума на пациента. RAC - основен метод serodiagnosis на вирусни инфекции (сред налична). Реакция открива допълнение-IgM и IgG, но не се прави разлика между тях; за оптимизиране на състава на резултатите от реакцията изисква определени умения на персонала.
RIF. Ако е възможно, да се биопсия на заразена тъкан и наличието на търговските комплекти AT, маркирани с флуоресцеин, диагнозата може да потвърди, реакцията на директна имунофлуоресценция.
Формулиране на реакцията включва инкубиране на тъкан с АТ и тяхното последващо отстраняване на флуоресцентна микроскопия проба. Immunosorbtsionnye методи за идентифициране на антивирусни антитела Immunosorbtsionnye методи (например, ELISA и RIA) са по-информативни като IgM и IgG открити поотделно, което позволява да се направят някои заключения за динамиката на инфекциозния процес или състоянието на възстановяването след болест. За идентифициране на AT известен AH сорбира върху твърд субстрат (например, по стените на епруветки, пластмаса микроплаки, петриеви панички) и като се правят различни разреждания на серума на пациента. След подходящо инкубиране, несвързан AT отстраняването въвежда човешки Ig антисерум белязано с ензим, и процедура инкубиране се повтаря изпиране несвързания AT и да хромогенен субстрат (чувствителни към действието на ензима). Тъй като промяната на цвета е пропорционална на съдържанието на специфичните AT, че е напълно възможно да се определи тяхната титър спектрофотометричен метод. В диагнозата ХИВ-преобладаващата намерен от имуноблотинг.
Откриване на вирусни антигени (Ag). ELISA. В момента има вече търговски комплекти за откриване на някои патогени AG, което позволява да се идентифицират за 5-10 минути. За идентифициране на антигени върху твърдата фаза на сорбиран известен AT и се добавя серум, съдържащ AH; След инкубиране, несвързан AG се декантира, системата се промива и се маркира при специфично за сорбиран АТ. Процедурата на инкубиране и промиване, хромогенен субстрат е, положителен резултат се определя при смяна на системата за боя. ДНК хибридизация - силно специфичен метод за идентифициране на вируса геном след хибридизиране допълнителни ДНК молекули. Като маркер ензими, използвани и изотопи.
Методът измерва способността на вирусна ДНК, хибридизиращ с белязана комплементарна ДНК; специфичност на метода е пряко пропорционален на дължината на комплементарна верига. Обещаващ метод ин ситу хибридизация на нуклеинови киселини. За производството на реакцията белязан ДНК се прилага за биопсия тъкан (включително фиксирани с формалин или затворена в парафинови блокове) и се записва взаимодействие с комплементарна ДНК. Методът се използва за откриване на херпесния вирус, човешки папилома вирус, Епщайн-Бар и други.
Свързани статии