Цитопатни ефекти се оценяват чрез микроскопия клетъчни култури. По степен на увреждане на клетките е изолиран вируси с високо или средно цитопатичен. Умножава-определени вируси в клетъчни култури се придружават от нарушена морфология монослойни клетки. Някои вируси причиняват характерни цитопатичните промени, които (в зависимост kliniches Coy картина на болестта) ви позволява бързо да направи предварителна диагноза. Например, възпроизвеждането парамиксовируси (вируса на морбили, паротит, PC-вирус) е придружен от външния вид-ЕМ характерни многоядрени гигантски клетки; Аденовирусите предизвика образуването на скопски депозити на големи кръгли клетки, и в размножаването на клетките херпесвирус кръгла форма дифузно разположени през монослоя.
Плака. "Плаки" се наричат отрицателни колонии - парцели разкъсани клетки, които приличат на осветяване площ на монослой клетка покрита със слой от агар. В някои случаи, дозата и цитопатогенен вирус експресира в плака-образуващи miolo - Зах (PFU).
Телата на включване. Много вируси причиняват инфектираните клетки, включени в характерни образувания - натрупване на вирусни протеини или частици, които са видими в светлинен микроскоп. Включените тела могат да бъдат разположени в цитоплазмата (Guarneri телешки с едра шарка) и в клетъчните ядра (аденовируси).
Липсата на CPE. Някои вируси (например вируса на рубеола) не показват цитопатичен ефект. Те могат да бъдат определени от намесата на друг вирус известно, че причиняват дегенерация на инфектираните клетки.
Феномен gemadsorbtsii. Много вируси, заразени клетки придобиват способността да се адсорбира на повърхността различни червени кръвни клетки. Явлението има gemadsorbtsii общи механизми с хемаглутинационен и се проявява в ранните етапи, преди началото на цитопатичния ефект на първата, в негово отсъствие или слаба експресия на.
"Цветна реакция". Хранителната среда се използва за поддържане на клетките, индикаторът VNO-FNF. Клетъчният растеж се придружава от натрупване на метаболити, промяна на рН и индикатор за промяна на цвета. Инфекция с вируса култури силно инхибира клетката tabolizm ме-и средата запазва първоначалния си цвят.
Rapid диагноза. За бързото идентифициране на вирусна инфекция разработени методите,-gochislennye на бърза диагностика базирани на откриване на вирусен Ag. Например, за HIV ranneydiagnostiki широко използван ELISA, който открива повърхностен Аг вирус.
Количествено определяне на вирусите се осъществява по два начина - изследване на заразни и количествено определяне на вирусния Ag. Определяне на титъра на вирусната инфекция е до голяма степен зависи от метода на количествено изследване; Y бактериофаг съотношение инфекциозност на частиците е около 1 (т.е., всеки вирусни частици е в състояние да причинят инфекция), това съотношение е 01:10 (понякога по-висока поради действието virusingibiruyuschego фактори резистентност) за животински вируси.
Някои инфекциозни вируси. Най-достъпни под формата на количествено - отчитане на броя на вирусни "плаки". Директни тестове за инфекциозност разтваря прилагане за създаване на инфекциозна доза (ID) или летална доза (LD) на вируса на изследване (обикновено се изразява в LG). ID50 - разреждане заразява 50% от клетките; LD50 - разреждане, която убива 50% от засегнатите клетки или животни.
Откриване на вирусни частици и вирусен Ag. Най-често срещаният метод - количествен реакцията хемаглутинацията. Методът се основава на способността на сорбира вирус-vatsya на повърхността на червените кръвни клетки от животни и хора. Количественото електронна микро-ROSCOP използвана за броене на общия брой на вирус (но не инфекциозен) частици в обекта за изпитване (например, културална течност).
Проучването на морфологията на вируса е възможно само с помощта на електронен микроскоп, едно към често, този метод не е на разположение, поради липса на такъв скъп и сложен устройство. Освен това, много патогени са морфологично подобни, което намалява стойността на този метод. Най-разпространеният метод за микроскопия на съдържанието везикул и тъканни екстракти на боядисване завода (отрицателен контрастни), последвано от преброяване RHK или ДНК-съдържащи вируси. Електронна микроскопия ви позволява бързо да намерите о- и парамиксовирусите при изпълнение на дихателните пътища, херпес вирусите в течност мехурчета и ротавирусите в изпражненията.
Серологични методи за идентификация
В повечето вирусни инфекции се развиват имунни реакции, използвани за диагностика. Клетъчната реакция обикновено се оценява в тестове лимфоцитни цитотоксичност срещу инфекциозни агенти или техни заразени клетки-мишени или определени lities SPO-лимфоцити реагират с различни митогени и Аг. В практическата Laboratories-Ри израз на клетъчни реакции рядко определена. По-често срещани са намерени мет ВНОС за идентификация на антивирусната AT.
РН се основава на подтискането на цитопатогенен ефект на вируса след смесване със специфичен АТ. Файл вирус смесва с известните търговски антисеруми след подходящо инкубиране и се въвежда в клетъчния монослой. Липсата на клетъчна смърт показва несъответствие на инфекциозен агент и известни АТ.
Инхибиране на хемаглутинация. HIT се използва за идентифициране на вируса, начина, по който неправителствена лепя разнообразие от еритроцитите. За тази хранителна среда се смесват съвместно провеждане на възбудител, с известни търговски антисерум и допринасят за клетъчната култура. След инкубация, способността на културата да хемоаглутинация, а в неговото отсъствие прави сключването на несъответствие на антисерум вирус.
Инхибиране на цитопатичния ефект на намесата на вируси. тороид на реакцията са в състояние цитопатичен ефект в резултат на намесата на вируса, използван за идентификация-katsii патоген, пречи на известния СРЕ вируса в култура Chuv-ност на клетките. За тази цел културалната среда, съдържаща вируса на изследване, което търговски серум (например, вирус на рубеола го подозира), инкубира се и зарази втора култура; 1-2 дни в което го прави известен цитопатогенен вирус (например, всеки еховирус). В присъствието на цитопатичен ефект се заключи, че първата култура е заразен с вирус, приложни съобразят AT.
Директен имунофлуоресценция. Сред другите тестове най-широко намерено директна имунофлуоресценция реакцията (най-бърз, чувствителен и възпроизводим) .Naprimer, идентификация на CMV цитопатичен ефект изисква най-малко 2-3 седмици, и използването на белязано моноклонално AT идентификация е възможно след 24 часа. При един набор от такива реагенти те могат да се прилагат в култура, инфектирани с вируса, се инкубира, промива се и реагент не е обвързана да се изследва чрез флуоресцентна микроскопия (в позволява да се идентифицира присъствието на флуоресценция на заразения klet к).
Свързани статии