Гликогенът е локализиран в цитоплазмата на клетки и играе важна роля в метаболизма на клетките. Когато гликоген цитохимични проучване използва предимно PAS реакция или PAS-реакция (наречени реагенти - перйодна киселина-Шиф).

Shabadash метод

Под влияние на гликоген калиев перйодат окислен за образуване на алдехидните съединения лесно реагира с реагент на Шиф (-fuchsin серниста киселина). В местата на локализация разкри гликоген черешово виолетово оцветяване интензивност от които може да се съди за размера на гликоген в клетките.

Съдове и оборудване

• Beaker чаши или кювети 50 мл.
• Измерване на цилиндри.
• Завършва пипети.
• Колби с 250 мл капацитет.
• Фуния.
• Горелки.
• Термостат.
• Везни.

• 0.03 М разтвор на калиев перйодат или натриев: 230 мг перйодат разтваря в 100 мл дестилирана вода. Подгответе се преди употреба.
• Шиф реагент: 1 г основен фуксин се разтваря в 200 мл кипяща дестилирана вода. След охлаждане, към разтвор на 1 г калиев метабисулфит и 20 мл 1N. разтвор на солна киселина. Оставя се да престои един ден. За пълна избелване добавя раздробена таблетка карболфуксин, оставя за един ден, след което се филтрува. Реагент се съхранява на тъмно (за предпочитане студена) в плътно затворен контейнер. Използваеми за няколко месеца (леко зачервяване показва непригодността на реактива).
• Кисел вода до 10 мл 10% разтвор на калиев метабисулфит се прибавят 200 мл дестилирана вода и 10 мл 1N. разтвор на солна киселина. Подгответе се преди употреба.
• Shabadash реагент: 100 мл етанол се прибавя 1,8 грам на меден нитрат, 0,9 г калциев нитрат и 10 мл формалин.
• 1N. солна киселина (82,5 мл концентрирана солна киселина, специфично тегло 1.19 долива с дестилирана вода до 1 литър).
• 0.1% алкохолен разтвор на бледо зелена боя (lihtgryun).

цвят Ход

• Съставите фиксирани (веднага след приготвянето) във флуидна Shabadash продължение на 30 минути.
• Измитите в две промени дестилирана вода.
• Потопени в разтвор на периодат продължение на 20 минути (на тъмно).
• Промива се три промени на дестилирана вода.
• Серниста промива във вода (за 1 - 2 минути).
• Шифт в продължение на 30 - 40 минути (в на тъмно).
• Промива се три промени на серниста вода на 3 минути.
• Промива се три промени в дестилирана вода в продължение на 3 минути.
• Мръсна светлина зелена боя за 10-20 секунди.
• Измитите в дестилирана вода.

За реакцията удобно всички химически разтвори се поставят в чаши или кювети и носят лекарства в горната последователност.

В момента има реагенти за производство цитохимикали проучвания гликоген фабрика, които са по-прости за използване. За съжаление, не всички от тях са с добро качество.

Метод Резултати Shabadash

Гликогенът е оцветен в цвят череша лилаво на зелен фон на лекарството.

Изчисляването на количеството на гликоген, произведен от полу-количествен метод и се изразява като процент.

Освен гликоген, положителна реакция може да даде такива PAS-позитивни вещества като неутрални и кисели мукополизахариди, мукопротеини, гликопротеини и други. Гликоген лесно различава от други вещества с слюнка проба или диастаза.

Проба от слюнка

Лекарството се поставя в прясно слюнка и се оставя да престои в продължение на 30 минути в пещ. След получаване на петно ​​върху метод гликоген по-горе. Инкубирането на препаратите със слюнка причинява повреда на гликоген и реакционната смес с реагент Schiff не се получава розово оцветяване.

Гликоген могат също да се идентифицират чрез предварително инкубиране с амилаза намазки (1 мл филтрува амилаза разтваря в 40 мл физиологичен разтвор) за 30 минути в пещ.

На практика проба слюнка не обикновено се извършва обаче при PAS-позитивни материал се разбира като правило, всички полизахариди, а не само на гликоген.

Референтни стойности Shabadash метод

В периферни кръвни намазки гликоген, съдържаща се в цитоплазмата на неутрофили (като изобилие фин пясък), лимфоцити цитоплазма (като малък брой големи зърна) и тромбоцити (като един голям зърно). В костния мозък точковидна гликоген открива в неутрофили различна степен на зрялост, лимфоцити и мегакариоцити.

В зрели еозинофили и базофили PAS-позитивни материал е както следва: специфични гранули остават неоцветени и се открояват на фона на дифузно оцветяване на цитоплазмата.

В моноцитите гликоген често открива под формата на фин прах, подобни на зърно на фона на светло розово на цвят кървене.

Обикновено, от 3 до 10% еритроидни клетки съдържат мукополизахариди.

В костния мозък мегакариоцити гликоген се открива във формата на гранули (от единични до 30-50), наподобяващ клъстери на тромбоцити. При здрави хора, броят на мегакариоцитите glikogenpolozhitelnyh е 58,45 - 65,55%. тромбоцити PAS-положителни материал открити под формата на фини гранули разпръснати по периферията клетка или под формата на интензивни централно разположени петна.

Клиничната значимост на метод Shabadash

Повишено съдържание на гликоген в неутрофили се наблюдава в различни възпалителни процеси, eritremii, диабет, намаляване - ако агранулоцитоза, лъчева болест, хронична миелоидна левкемия, особено в развитието на процеса.

Увеличаването на броя на лимфоцитите glikogenpolozhitelnyh (70-80%) е типично за лимфопролиферативни заболявания, особено хронична лимфоцитна левкемия.

Когато тромбоцитопенична пурпура и симптоматични тромбоцитопения брой glikogenpolozhitelnyh форми мегакариоцити значително намалени след спленектомия тя се издига до нормални стойности.

При остра левкемия гликоген може да бъде открит в бластни клетки: в остра миелоидна левкемия под формата на фин пясък в цитоплазмата или под формата на слабо дифузно оцветяване това, и в част бласти PAS реакция е отрицателен. В остра промиелоцитна левкемия, има светло дифузно цитоплазмен оцветяване. В реакция monoblastah може да бъде отрицателна, слабо положителна в дифузно или дифузен гранулирана форма (когато реакционният продукт се открива във формата на разпръснати малки или средни гранули, които са разположени по протежение на ръба на цитоплазмата в дифузно фон). Когато erythromyelosis гликогеновите гранули в еритробластите наблюдавани под формата на дифузно оцветяване на различна интензивност - в нормобласти. ЛИМФОБЛАСТИ съдържат гликоген в цитоплазмата под формата на средни и големи гранули борд разположена около сърцевината, понякога сливат в блокове на небоядисани фон. Броят на клетките с такива характер PAS реакция варира за различните случаи на остра лимфобластна левкемия.

Цитохимикали проучване на гликоген може да се извършва не само в кръвта петна и костен мозък. Например, можете да се запознаете с петната на вагиналния епител и резултатите от изследването, за да се прецени функционалното състояние на яйчниците. Обикновено жените се наблюдава много гликоген в клетките, докато изчерпване на гликоген представлява нарушение на функцията на яйчниците.

В тумори гликогеновите по различен начин: зрели доброкачествени тумори съдържат много гликоген в незрели ракови тумори драстично намалява размера на гликоген. Намалена гликоген в туморни клетки, вероятно може да се използва като индикатор на злокачествено заболяване.

Микрографии на PAS реакция:

Литература:

Цитохимикали изследвания миелопероксидазната

Миелопероксидаза е лизозомния ензим, който катализира присъствието на водороден пероксид окисление на различни субстрати. Той е локализиран предимно в специфичните азурофилните гранули в цитоплазмата и е маркер за гранулоцити миелоидна серия от клетки. Миелопероксидаза е открит в клетки от серията гранулоцитна, тъй myeloblast.

Цитохимични анализ на липиди

Цитохимични проучване липид основава на използването на багрила, които се разтварят в липиди (Судан III, IV Судан, Судан Черно и др.). За да се идентифицират неутрална мазнина са Судан III, оцветяване на мазнини оранжево. Липиди, идентифицирани по-добре с Sudan Black (черен оцветяване).

Кръгови изследвания Гелър

Пръстеновидна сонда Geller се отнася до качествен реакции определяне на протеин в урината. Тъй като то се основава на реакцията на коагулация, изследва урината трябва да отговарят на определени изисквания: да бъдат прозрачни и имат кисела реакция.

броене myelokaryocytes

За изчисляване myelokaryocytes костен мозък точковидна разрежда 200 пъти. За тази цел, от 3 до 5 мл 4% разтвор на оцетна киселина се прибавя 0.02 мл точковидна. Съдържанието на тръбите се смесват добре и се пълнят Горяев камера. След утаяване на образуваните елементи (след 1 - 2 минути) Брой myelokaryocytes големи квадрати 100 (подобни на преброяване на броя на левкоцитите в периферната кръв).

Морфология мегакариоцитна зародишни клетки

Megakaryoblasts - прогениторни клетки мегакариоцитна серия. Размер - около 20 микрона. Ядрото е кръгла, с Wiremesh хроматинова структура, понякога във вид на сплетените намотка. основна структура по-груба, отколкото недиференцирани взривове често видими нуклеоли. В цитоплазмата е базофилни, зърно-свободен, има тесен ръб. Често клетка необработени контури, с цитоплазмени процеси и образуването на "син" плочи.