Култура клетки от висши растения
Техники за култивиране на растителни клетки единични
Отделните клетки са култивирани за получаване на клонове, изучаване тяхната генетична и физиологичен променливост или стабилност. В допълнение, отглеждането на отделни клетки ни позволява да проучи условията, които определят появата на стимули за разделянето в клетките, изолирани от влиянието на различни популации от клетки или тъкани. Отделните клетки също са важни за клонална селекция на мутантни, хибридни и трансформирани линии. Обикновено такива клетки са въведени маркерни гени, които позволяват селекция.
В допълнение, отделните клетки могат да служат като модел за сравнително изследване на физиологичните процеси в тъкан и изолирана клетка. Например, за изследване може да се сравни процес photorespiration на фотосинтеза в единично клетъчно ниво и на целия лист мезофилни тъкан.
Отглеждането на изолирани клетки се състои от два етапа: 1) изолиране на интактни растителни клетки или тъкан калуса; 2) осигуряване на условия за растежа и развитието на изолирани клетки.
Първата стъпка е да се разпределят на жизнеспособни и интактни клетки от цялата растителна тъкан или калус тъкан. Това може да се постигне чрез третиране с пектиназа тъкан накисване води до неговите клетки. Въпреки това, не винаги след такова лечение клетките запазват способността за образуване и разделяния последващо тъкан. По-добре е да има отделни клетки от суспензионни култури или калус свободно. Идеални отделните клетки са протопласти, които формират клетъчната стена.
След това клетките бяха изолирани чрез micromanipulators, или от няколко последователни разреждания. При първите опити за култура единични клетки произхождат важен научен проблем: как да стигнете до споделите клетки, изолирани от влиянието на други популации от клетки или тъкани? Отделните клетки се държат различно от техните концентрации под формата на агрегати в маса суспензия или калус на повърхността на хранителната среда.
За решаването му хипотеза за "фактор инсталация". Това е кръстен на веществото стимулиране разделянето на една клетка. Определя се, че този фактор е химична природа, термолабилни, е разтворим във вода, nizkomolekulyaren (МК Павлова, RG Butenko, 1965), vidonespetsifichen, не заместител на добре известни растителни хормони, sinergichen с brassinosteroids. някои изпълнения индивидът клетъчната култура се препоръчва.
Първо изберете условията, подходящи за разделението на една клетка, е било възможно през 1954 Muir, Hildenbrantu и Рикър. Този метод се нарича метода на "тъкан - медицинска сестра" (Фигура 12)..
Фиг. Схема 12. Използване като мазол "тъкан - медицинска сестра"
Cell изолира при използване микроманипулаторът на ронлив калус директно с филтър парче 8 * 8 mm, се поставя на върха на калус тъкан от който е получен в клетката. Калус трябва да бъде в активна фаза на растеж. Възможно е също така като "бавачка", за да използвате, новообразувана тъкан на други, свързани с растителни видове. В този случай, клетките растат и да се делят. Със застаряването на мазол - детегледачка филтър с клетки се прехвърля към младия мазол. Когато тъканта на клетките достигне размер от 0.5 - 1 mm, може да се засаждат директно в културалната среда.
Проведени са също така чрез утаяване на клетъчните експерименти директно върху агар среда, но не непременно до филтъра, която в рамките на няколко дни в контакт с един млад, бързо развиваща се мазол тъкан. Тъй като тези изследвания показват, че постоянно клетка контактува с не е необходим филтър с калус маса за клетъчно делене, беше предложено да се използва старата културална среда за стимулиране на една клетка да се разделят.
Можете да използвате метода на "хранене слой". За да направите това, вземете клетъчна суспензия от същия вид като една клетка, или тясно свързани видове. Клетъчната суспензия трябва да бъде в началото на експоненциалната фаза на растеж цикъл. През 1959 godu Бергман предложен култура филтър суспензия (в този експеримент беше тютюн, зърна) асептично през един слой от муселин (клетки 0.3 * 0.1 мм). В резултат на това суспензия, състояща се от 90% от отделните клетки. Тази суспензия се смесва с агар хранителна среда със същия състав, който се използва за отглеждане на суспензия (среда, съдържаща 0.6% агар). Сместа се излива тънък слой (1 mm) в петриево блюдо. Агар споделен клетки, но не пречи на обмена на химически сигнали между тях, и дебелината на слоя се оставя да наблюдава поведението им под микроскоп.
Индуциране на разделянето на отделните клетки ще бъде на разположение, когато се прилага много богата на хранителна среда, например Као и Mikhailuk среда. Обемът на средата, в която се намират клетките имаха минимална (микрокапки обем 20 мкл).
Всички тези методи култивиране може да "чувстват" фактор климатик. Той се получава или в количество, достатъчно клетки "кърмене слой", "плат - медицинска сестра" или съдържащи се в суспензия, където клетки, култивирани по-горе, или не се губи голям обем на среда. По този начин, фактор причинява клетъчно делене, продуциран от клетките, но в малки количества. Тя е само чрез увеличаване на броя на клетките, които произвеждат този фактор е, че той не се разсейва големи количества от хранителна среда или намаляване на обема на средата, в която клетките се отглеждат се, можете да я накарам да споделите.
Други глави в този раздел: