вирусни методи култура. клетъчни култури
Паразитиращи на генетично ниво като молекулата NA, вируса, лишена от системи за енергиен обмен не може, като бактериите се размножават в изкуствени медии. Процесът на репродукцията (възпроизвеждане) изцяло поради метаболизъм ограничен обхват на чувствителни организми и клетки, които се наричат майстори Virology.
Вирусите, отглеждани в клетъчни култури или тъкани, 7-13 дневни кокоши яйца и лабораторни животни, сред които най-често използваните бели мишки, за предпочитане 1-4 дни смукателите, зайци, сирийски хамстери, и порове.
Клетъчна култура - се отглеждат ин витро (извън тялото) в специални условия, различни животински и човешки тъканни клетки, включително белите кръвни клетки, запазват техния дял и чувствителността към някои вируси. Основното изискване при работа с клетъчни култури и вируси - стриктното спазване на стерилност, което се постига чрез асептично вирусологичен бокс.
За култивиране клетки (тъкани), използвайки различни среди (199 или игла), съдържащи пълен набор от необходимите тях вещества (аминокиселини, пурини, пиримидини, въглехидрати, витамини и др.), Допълнена с телешки серум.
Има много видове клетъчни култури: 1) първична култура, способна на 5-10 пъти Passage; 2) неограничен трансплантирани; 3) poluperevivaemye представлява морфологично еднородни белодробни клетки и човешки бъбрек задържащ канали 50 диплоидни хромозоми.
Всички тези видове клетки се отглеждат при температура от 36-37 ° С, добив ultrathermostat в рамките на 5-7 дни в добро образуване монослой прилепен към стените на матраци, флакони и епруветки. Контрол на растежа на клетки под микроскоп ниско увеличение, вариращо от 3-4 дни.
Първични клетъчни култури. Източникът на първични култури от клетки, притежаващи висока потентност растеж птица ембрионална тъкан (основно пилешки фибробласти), опитните животни, маймуни, но повечето от тях са получени трипсинизират тъкан прекратена 8-14-седмични човешки ембриони. За тази фетален тъкан мляно с ножица в малки парчета от 2-4 mm и 2-3 пъти промиват без кръв с Hanks буфериран физиологичен разтвор, докато течността е почти прозрачен.
След това, за унищожаване на парчета извънклетъчната матрица тъкан излива се затопля до 32-37 ° С 0.25% разтвор на трипсин и миксер за електромагнитна бъркалка суспензия се разбърква в продължение на 10-30 минути. Първата част на трипсинизирани клетки се отстраняват. Подходящ за отглеждане на клетки вируси, получени след многократно трипсинизация. Освен клетка, съдържаща течност за разделяне на големи буци тъкан и съединителната влакна се филтрува през тензух, центрофугира при 800-1000 об / мин в продължение на 5 минути. Супернатантът се декантира, промива с разтвор на Ханкс и се разрежда със среда 199 (или игла) утайката за получаване на 1 мл 100 000-400 000 клетки. Клетъчната суспензия се дозира в 1 мл флакони или 20-100 мл стъклени матраци, плътно затворен с гумени запушалки и се поставя в инкубатор при 37 ° С Матраци са разположени в хоризонтално положение и тръби -под ъгъл 5-10 ° в специални тави. Поставяне на стъкло клетка в продължение на няколко дни, за да се получи монослой.
Непрекъснато клетъчна култура. Той е стабилен, или, тъй като те често се наричат, обезсмъртена (безсмъртни) клетъчна линия, автономно реплициращ, като бактерии. Получава се от техните нормални човешки тъкани (амнион - FL, А-0, А-1; бъбречни - Rh, 1SHCH, диплоидни клетки); животни и злокачествени тумори (matki- цервикален HeLa, ларинкса (бъбрек на маймуна - - Vero, MS, BSC-1 PC и роговица -SIRK заешки бъбрек) - Нер-2, орално - KB, човешки костен мозък - D-6 и др.), които се отглеждат чрез последователни пасажи на хранителна среда е продължение на много десетилетия.
Препоръчано от нашите посетители:
Свързани статии