Вектор - ДНК молекула, способна да саморепликиращ в клетки от различни организми и осигуряват възпроизвеждане (клониране) и затворена (експресията) вградени в него изкуствено всеки ген. Първият успешен вектор-вагона в генното инженерство се превърна в кръгла плазмид pSC101. Тя носи един сайт на разцепване с рестрикционни ензими EcoR1 и се превръща под действието на този ензим от пръстена в линейна молекула, краищата на които могат да "увисването" помежду си, тя извършва антибиотична резистентност ген за устойчивост на тетрациклин, и по този начин лесно да бъдат открити в бактерии. Всички тези свойства pSC101 използвани за създаване на хибриден на първото клониране и ДНК. Плазмид 322. Той има повече зони, за да бъдат намалени с различни рестрикционни ензими, е възможно да се "шиене" различни ДНК фрагменти в двете си маркери за селекция на бактериални средства: в допълнение към тетрациклин, плазмид кодира повече резистентност към ампицилин. Ако една от тези гени (например, ген за резистентност към тетрациклин) се изрязва с рестрикционния ензим специфично, когато вграждане в място цялост чужда ДНК се разстрои генен фрагмент и ги определена индикация изчезва. Това ви позволява да изберете хибриден плазмид. Трансформираните бактерии на E.coli, т.е. съдържащи хибридни плазмиди растат в среда, съдържаща ампицилин, но не растат в среда с два антибиотика, защото ген на резистентност към тетрациклин в вложката плазмид повреден. Селективен растеж позволява да изберете и растат само клетки, съдържащи хибридни ДНК молекули. Джийн Lacz. в която се намира полилинкер или част, съдържаща 10 рестрикционни сайтове. Бактериални колонии, съдържащи нормална и увредена лесно внасяне на гени се различават, ако поставите на клетките в блюда на Петри в сряда. Ако образувани колонии, оцветен в синьо, тези бактериални клетки не съдържат плазмид вмъкване на чужда ДНК. Бактериални клетки, съдържащи плазмид с интегрирана ДНК форма неоцветени колонии. Гените подобен Lacz репортер получиха името.
В допълнение към плазмиди вектори успешно се прилага фаги и вируси. бяха създадени късно козмиди - специален тип вектори, комбиниране на свойствата на плазмида и фаг.
Методи за получаване на необходимите гени в генното инженерство. Изграждането на генни банки.
Въвеждане на чужди гени в клетки и мониторинг на тяхната експресия.
плазмид въведен клетки се поставят в приемащите клетки чрез генетична трансформация (Трансформация на Coli клетки Escherichia). През 1970 г.. Метод за въвеждане на ДНК в бактерии, използвайки калциев хлорид, за да се получи компетентни клетки. Електрофорезата се основава на принципа на преместване на емисиите на електрическо поле от един полюс до другия при скорост в зависимост от техния размер (позволява да се следи положението на ДНК в гела). Otklonirovannuyu в вектори цялата геномна ДНК или комбинация от отделни гени организъм наречен банка или библиотека от гени. Изолираният и пречистен геномна ДНК от клетките на тялото, а след това се подлага на раздробяване, използвайки рестрикционни ензими, след това клониран рекомбинантни молекули. Банката може да бъде пълна или частична. Броят на клонове зависи от размера на генома и големината на ДНК фрагментите. Първо в генната банка, създадена през 1976 година. за Е.коли. генни банки служат като изходен материал за изследването на регулиране, структурата и функцията на гени и протеини в тялото. През 1969. allaninovoy синтезира генен трансфер РНК от дрожди. През 1976 г.. синтезира сегмент от ДНК на E.coli съдържащ тирозин тРНК ген. Подходи за откриването и изолирането на гена, методът на избор на селективна среда, хибридизация с радиобелязан получаване на ДНК, за да се изолират гени също се използват имунологични методи radioimmunoditektsii метод.
Свързани статии