Ретровирусният вектор (ретровирусен вектор, броня задна - префикс означава "назад", "назад", и вирус - отрова; .. шир вектор - извършване лагер) - вектор, съдържащ елементи ретровирус геном. необходими за неговото репликация в клетките. В най-простия вариант на вирусния геном се отстранява от гените, кодиращи специфични антигени (GAG), обратна транскриптаза (Pol) и протеинови обвивки на вирусни (Env), и вместо тях поставете избираем маркерен ген (напр. Неомицин фосфотрансфераза ген). Обикновено, ретровирусен вектор съдържа допълнително полилинкер, което позволява клониране на чужди гени в него, и гена позволява подбор на клетки с интегрираната ретровирусен вектор на селективна среда. Ретровирусен вектор запазва присъщата способност на ретровируси, въведени в генома на клетката гостоприемник и се реплицира в тях, а само в присъствието на вирус помощник. Ретровирусният вектор се използва за ефективно включване на чужда ДНК в генома на еукариотни клетки, но има редица свойства, които ограничават практическото използване в медицината. По-специално, когато въвеждането на ретровирусен вектор в генома може да причини инсерционни мутации, водещи до различни патологии на организъм. Освен това, т. К. Възпроизвеждане ретровирусен вектор, както и естествени ретровируси, проведени последователно домакин геном като ДНК (провирус) и РНК (генома на вирусни частици), когато се осъществява клониране във вектор ДНК фрагменти ретровирусни съдържащ интрони, последният като обикновено загубил в резултат на снаждане. Въпреки това, да продължи да използва ретровирусен вектор в експерименталната биологията и генна терапия.
Използване на ретровирусни вектори, не са способни самостоятелно репликация, осигурява ефективно въвеждане на чужда ДНК в генома и постоянството на генетични изменения. Въпреки това, тези вектори са изградени само в делящи се клетки, може да предизвика инсерционни мутации дават относително ниски титри на рекомбинантен вирус, и експресията на въведения ген често се намалява до много ниски нива в рамките на няколко месеца.
Въпреки това, за доставяне на трансгени в човешкото тяло за целите на генна терапия ретровирусни вектори се използват най-често. За въвеждането на чужда ДНК в генома на животно може да се използват рекомбинантни ретровируси. Предимствата на ретровируси, е, че в този случай, интеграцията е най-известен механизъм в един сайт в хромозомата е изградена само едно копие, и да не се случва пренареждания вграден материал. Друг от своя полза - лекотата на доставка на различни етапи на развитие. Предимплантационни ембриони могат да бъдат обработвани или концентрирани вирусни запаси, или чрез ко-култивиране в монослойна клетъчна линия, produtsiruschey ретровирус. Можете също така да използвате постимплантационна ембриона. Всички ретровируси са добри за последната цел, но зародишни клетки са инфектирани с ниска честота и следователно ефективността на производство на трансгенни животни се намалява.
Специфичността на взаимодействие с повърхността на прицелните клетки ретровируси по време на инфекция гарантира тяхната вирион слой протеин, кодиран от ген ENV. продукт, който е в контакт с рецепторния протеин на инфектираните клетки. Това създава предпоставки за посока промени кръг вирусни домакини, т.е. клетки, които той може да зарази, от промени в протеин от вирусната обвивка. Много ретровируси имат тесен диапазон домакин, (екотропни вируси), например, човешки имунодефицитен вирус (HIV). който е в състояние да инфектира подгрупа на лимфоцити, продуциращи CD4 върху тяхната повърхност рецептор.
Най вниманието като средство за доставка на трансгени в генната терапия се дава вирус Moloney миши левкемия (MoMLV). който е способен да инфектира почти всички изследвани гризачи клетки. Вирусите група MoMLV-А са в състояние да заразят голям брой клетки на бозайници, включително човешки клетки. Вирусите с широка гама гостоприемник се наричат амфотропен.
Разработено три основни стратегии на изкуствен тропизъм промяна (приемници) вирус: директна промяна в последователността на гена нуклеотидна ретровирусна белтък на обвивката връзка протеин от обвивката на нови лиганди и Псевдотипичността.
Недостатък на ретровирусни вектори - ограничения размер на ДНК, които могат да носят със себе си. Само фрагменти от по-малко от около 10 KB, могат да бъдат транспортирани в геномите по този начин.
Ретровируси, като самата природа подготвени за генетични инженери да ги използват като вектори за прехвърляне на генетичен материал в генома на организма, че тези генетични инженери възнамеряват да променят: Те се въвежда стабилно в генома, те могат да се въведат в генома на чужда ДНК. В допълнение, друг глоба качество: можете да изхвърли вирусните гени (не мога да понасям, пол, Env), и вместо да ги между двата LTR поставете този ген инженери имат нужда, и да спаси потенциал на интеграция и прехвърляне на чужденец информация ретровирус в генома на гостоприемника. Нека да видим как това се прави с помощта на клетъчни линии, опаковката.
Свързани статии