Ограничаване сайт. Ограничаване ензим. VNTR-полиморфизъм.
Един от първите е открит от дължината на рестрикционните фрагменти полиморфизъм (RFLP). Фактът, че тези рестрикционни ензими (рестрикционен ензим) и как те работят са описани в глава 7. Всяка рестрикционен ензим пресича ДНК молекула разпознаване на специфична последователност от нуклеотиди към него, която се нарича рестрикционен сайт.
Ако рестрикционния сайт, където и да е, има мутация и нуклеотидната последователност промени, рестрикционен ензим, който не разпознава като променена сайт и съкращения в молекулата на място ДНК. В същото време тя продължава да рестриктазата нарязани съседните немодифицирани места за ограничаване.
В резултат на това, един от мутант ДНК рестрикционен фрагмент е дълъг от съответните ДНК фрагменти не са мутантни. За да се открие наличието на полиморфна рестрикционен сайт в ДНК, след третиране с рестрикционен ензим, се подлага на електрофореза.
По време на електрофорезата ДНК фрагментите са разпределени според тяхното молекулно тегло. Обикновено след смилане на геномни ДНК фрагменти, генерирани стотици хиляди. Тези фрагменти се денатурират, т.е. превръща в OD-nonitevye, те се прехвърлят nitrotsellyulezny филтър, с които те са здраво свързани. Припомнете си, че тази процедура се нарича Southern блотинг.
Тъй като някои рестрикционно отрязан ДНК често достатъчно търсене полиморфизъм може да се проведе като се използват различни ДНК сонди, предварително белязани с радиоактивен фосфор. Тези могат да бъдат части от пробите на гена или други ДНК последователности, локализация е известно.
Така, че е възможно да се установи мутации в гените, ако тези мутации променят рестрикционен сайт за конкретните рестрикционни ензими. Сега е известно стотици рестрикционни ензими, които разпознават различни нуклеотидни последователности. В разположение на изследователите има хиляди ДНК сонди за различните региони на генома.
С помощта на тези функции са довели до определянето на много хиляди полиморфни места в човешкия геном. В повечето случаи е RFLP dvuhallelnuyu система (наличие или отсъствие на рестрикционно място), но с висока честота тези полиморфизми е успешно използвани за картографиране на много гени наследствени заболявания, включително mukovistsi доза, неврофиброматоза тип 1, и много други.
Значително по-голям брой на алели, а оттам и по-голяма генетичното разнообразие, както и информация стойност от друг вид ДНК полиморфизми, които се наричат променлив брой тандемни повторения, или VNTR-полиморфизъм.
Описвайки различните видове ДНК, които се случват в човешкия геном, споменахме минисателитни повторения. Тези повторения са разпръснати в целия геном, тяхната първична последователност може да включва до 80 нуклеотиди, и броя на повторенията на базисната последователност могат да варират в широки граници.
Откриване на полиморфизъм на VNTR-започва, както и идентификацията на RFLPs, рязане на геномна ДНК с конкретен рестрикционен ензим, електрофореза на фрагментите, тяхното денатуриране и Southern блот. Разликата се състои в това, че с помощта на хибридизация на ДНК проби, специфични за конкретна минисателитни повторете.
Свързани статии