Обработка и оцветяване на костната тъкан
за хистологични изследвания.
Преди да се пристъпи към декалцификация, костта като всяка тъкан, трябва да се подлага на определяне. Избор на заключване зависи от целта и естеството на изследването. Така пакостливи лекарства и идентификационните елементи костни фибриларни използва чист формалин (15-20% разтвор), а за цитологични изследвания предпочитане сложни скоби, също съдържащи формалин, защото намалява степента на подуване на структури влакна, с последваща обработка на тъкан ( . фиксатор Shtive например: живак дихлорид наситен воден разтвор - 76mL, формалин 20 мл ледена оцетна киселина 4 мл)
За определяне на мозайката да бъдат изрязани малки парчета кост (0,5-1 см), тъй като в резултат на ключалката с висока плътност прониква тъкан бавно. определяне на времето зависи от дебелината на детайла (не по-малко от 48 часа)
В края на обекта фиксиране старателно се промива в течаща вода или алкохол (например, след сложни фиксатори, съдържащи живак дихлорид), както и в следващите киселини обработка могат да образуват трудно разтворими утайки. След това, за целите на получаване обезмасляване се извършва чрез серия от нарастващите концентрации на алкохоли (50, 70 и 96%) и след това се регулира до концентрация на вода чрез алкохолите връзката надолу.
Декалцифициране се постига чрез третиране на кости, с използване декалцифициран течност имащи свойства на разтваряне на неорганични соли, без да вредят на структурните елементи на костите.
Когато декалцификация трябва да се придържат към следните основни правила:
1. Нанесете голям брой декалцифициран течност и да го замените всеки ден (количеството течност трябва да надвишава обема на обекта най-малко 50-70 пъти);
2. Dekaltsiniruemy обект поставен в горният течен слой е да осигури намаляване на дъното на разтворими соли (висящи части на нишка или чаша сито);
3. Поведение декалцификация за пълно премахване на минерални соли (но не perederzhivat материал в течности, тъй като това води до подуване и влошаване на фибрилни структури оцветяване)
Декалцифициране се счита за завършена, когато обектът става мека и лесно да се реже с нож, и без криза. Производството на процеса могат да бъдат проверени от степента на потапяне в обекта на дисекционен игла. Студено запалване лекарството и да го натиснете, не се препоръчва, тъй като това ще увреди деликатните костни структури.
Отстраняване на котления камък в един разтвор на азотна киселина (5-7.5%), най-общ метод. За да се получи работен разтвор в мерителна колба се излива 5-7.5 мл концентрирана реагент клас азотна киселина (плътност 1,40) и се разрежда с 100 мл дестилирана вода (разтвор може да се получи в големи количества в Proc чрез изчисляване на общото търсене). Използването на по-ниски и по-високи концентрации на разтворите не се препоръчва за декалцификация на костите, като първата причина набъбване и vtorye- увреждане на клетъчните структури. По-високи концентрации (до 10%) се използва само за декалцифициран зъби.
Изливане на желаното количество течност в подходящ стъклен съд, той е окачен на готови парче кост декалцификация. Разтворът се сменя всеки ден до пълното премахване на варовика. време декалцификация зависи от свойствата на обекта (стойност плътност) и концентрация на азотна киселина. Средната продължителност на декалцификация малки парчета кортикална кост 10-12 дни.
След завършване на отстраняване на котления камък да се елиминира подуване влакнести структури лекарство суспендира в продължение на 24 часа в 5% разтвор на натриев сулфат Na2SO4 или литиев Li2SO4 (в отсъствието на такива соли кост трябва да се поставят в алкохол 96%) и едва след това внимателно се промива в продължение на 1-2 дни в течаща вода.
Може да се съкрати получи декалциниран кост, поставяне на парче дребен директно в 5% разтвор на трихлороцетна киселина, съдържаща 10-20% формалдехид. Тази смес едновременно улавя и декалцифициран. Малка част от средна плътност може decalcify за 3-5 дни. След декалцификация след декалцификация промива с алкохол (nivkoem СЛУЧАЙ във вода).
Има и редица други начини за премахване на варовика, но всички те са базирани на същия принцип, както и да изисква спазването на общите правила, посочени по-горе.
След декалцификация на костната тъкан могат да се режат на замръзване микротом и попълнете целоидин или целоидин - парафин по обичайния начин. Попълнете восъкът не се препоръчва, тъй като това е лошо прониква калцият се отнема кост.
Най-често срещаният метод за оцветяване секции декалциниран кост -он SHmorlja (TIONINPIKRINOVAYA киселина).
Наситен разтвор на thionine в 50% алкохол.
В-1% воден разтвор на фенол.
В- наситен разтвор на пикринова киселина.
Преди употреба разтворът се изпразни една част (А) с 10 части разтвор (В). секциите са във водата се прехвърля за 10 минути към получената смес, и след това се изплакват с дестилирана вода и се поставя в 30-60 с наситен разтвор на пикринова киселина. След това секциите се промиват отново в дестилирана вода и се диференцират в 70% алкохол до тъмно червено. След това те се прехвърлят в 96% алкохол, при което продължи диференциацията (под контрола на микроскоп, докато общия фон изключване придобива кафяв (или блато) цвят и костни клетки и техните процеси -. Red оцветени секции след това провеждат при 96% и абсолютен алкохол, карболфуксин - ксилол, ксилен, и вградени в полистирол.
Ако лоши срезове, оцветени поради удължено декалцификация в азотна киселина, първо трябва да се поставя в 2 до около 3 часа, 5% амонячна вода, а след това и се промива с дестилирана вода и след това петно.
Свързани статии