Micropreparations оцветяване за идентифициране на камшичета,
капсули, спори и зърна volutin
Откриване на камшичета
Камшичета на бактерии са много тънки и лесно разкъсан. Поради това, те могат да бъдат открити само със специално оцветяване или с помощта на електронен микроскоп.
Идентифициране на камшичета на бактерии, като се използват конвенционални методи за боядисване с анилинови бои невъзможно.
Камшичета, обикновено стават видими, ако лекарството е предварително обработен с байц и след това боя. Гравиран на наркотици по-лесно да възприемат цвят, но най-важното е, че камшичета до нанасяне на петна по тях растат и стават видими под микроскоп.
Има различни начини за камшичета оцветяване, но във всеки случай, в зависимост от индивидуалните свойства на бактериите трябва да изберете един или друг метод.
За успешното цвят камшичета при спазване на следните условия:
1. Почистете пързалка и стъклен капак трябва да е перфектно.
2. Продуктът трябва да бъдат получени от прясно агар суспензионна култура не повече от ден, и за някои видове (Vibrio, Bacillus Subtilis), не по-стари от 12 часа. Част от материала, взет от засяване линия (по-близо до кондензиране на водата), където повече вода се прехвърля в шишенце с 1 - 2 мл стерилна вода от чешмата. Епруветките се инкубират в продължение на 30 до 60 минути при стайна температура, след което суспензия от бактерии се прехвърлят капка стерилна чешмяна вода или физиологичен разтвор, отложен върху стъкления лист. Когато разпределението на материала на покритието върху парче стъкло, трябва да се внимава да не се повредят механично камшичета слана да ги откъсне от бактериална тялото.
НатриВка трябва да бъде тънък на физически лица биха могли да останат изолирани един от друг.
Водата трябва да се разпредели върху стъклото с тънък слой, за да се ускори изсушаването на лекарството и да се намали загубата на камшичета.
Най-често използваният метод за оцветяване камшичета Leffler (Loffler). Живопис техника:
1. суши и фиксирани намазка излива байц в количество за покриване на цялата повърхност на покритието стъклените слайди и се поддържа в продължение на 3 - 5 минути при стайна температура.
2. След това лекарството внимателно и старателно измити с течаща вода.
3. лекарството се прилага фуксин разтвор (1 част наситен алкохолен разтвор фуксин до 10 части вода) и препаратът се нагрява в продължение на пламък, докато парата.
4. Препаратът се промива с вода и mikroskopiruyut.
Получаване на петна за откриване на бактериален камшичета:
12 г танин се разтварят при нагряване в 48 мл вода и към този разтвор се прибавя 30 мл наситен разтвор на фуксин в 95% етанол. Разтворът се филтрува и се съхранява в запушена стъклен контейнер. Stain е готова за използване в рамките на няколко дни от подготовката и може да продължи няколко месеца.
За откриване на протозои имат камшичета препарати могат да бъдат боядисани по прост начин, като се използва метил синьо, разтвор на Lugol или усложнени от Романовски - Giemsa.
Идентифициране на бактериални капсули
Капсулите не са ясно изразен афинитет към основни багрила, така че да се открие капсули като се използват различни методи за получаване и тяхното micropreparations оцветяване, особено предвид образуването и запазването на капсули от различни видове бактерии.
За да се открие наличието на капсули трябва цветен фон в капсулата и външната цветен фон.
Вътрешна оцветени модел представени микробна клетка вътре в капсулата. И открит фон, заобикаляща капсулата може да бъде естествено или изкуствено.
Ако микроба запазва капсулата непрекъснато, т.е. не само в рамките на микроорганизма, но в хранителна среда (Klebsiella), подготовката за откриване на капсули могат да бъдат получени от културата се отглеждат ин витро в културална среда. И в този случай, външната среда се създава изкуствено.
Ако зародишни форми и задържа капсулата в микроорганизма (антракс, чума, пневмококи), в такъв случай е намазка - отпечатък на засегнатия орган убит микроорганизъм (черен дроб, далак, лимфни възли) или от слюнка, съдържание Bubo кръв. капсулата Външният фон ще бъде представен на тъканни клетки.
Предметните стъкла на културата за откриване на Klebsiella капсула те могат да бъдат оцветени по метода на Burri - Джинове:
1. На чисто стъкло да се прилага малка капка от черно мастило и капка от суспензия дневни агар култура капсулирани бактерии. Сместа се разбърква внимателно линия. След това още една чаша пързалка намазка направено, като петно кръв.
2. След изсушаване на въздух, и фиксиране на пламък препарат dokrashivayut на горелката в продължение на 2 - 3 минута карболфуксин фуксин Tsilya разрежда с дестилирана вода 1: 1.
3. След получаване се промива внимателно течаща студена вода, суши се и mikroskopiruyut. На тъмен фон са видими Тушев оцветени микробни клетки са заобиколени от безцветно капсула. При липса на капсула, клетка цвят магента, черен фон опира плътно.
В този случай, ако слайдовете получени от изпитвания материал, на намазка могат да бъдат боядисани един анилин багрило, съгласно метода на Грам, съгласно метода Romanovskgo - Giemsa. Във всяка от тези три spoosbov цвета на фона на оцветените тъканни клетки ще бъдат видими безцветно капсула околната оцветената микробна клетка. Откриване на спора.
Поради дебелината на черупката, и плътността съдържание, спорове остават небоядисани в обработката на лекарство анилинови бои прост метод или усложнени от Грам.
На оцветяване по Грам или Leffler спор вътре в микробни клетки оцветени цитоплазма появява като кръгли зърна или овална форма, силно рефрактивни.
Съществуват няколко метода за оцветяване спори (Ziehl - Neelsen в Ganzen в Orzeszkowa и др.), Която позволява да се постигне контрастен цвят на спори в цитоплазмата.
Техника цвят микроскопско стъкло:
1) при фиксирана препарат се наслагва лента от филтърна хартия (за предпазване на лекарството от утаяване боядисване кристали) се излива върху него и разтвор на Ziehl. Получаване внимателно се загрява в продължение на 3 - 4 минути на пламъка на горелката. Както изпаряването на багрило течност се добавя.
2) Филтърната хартия се отстранява и се нанася на намазка на 2 - 3 капки 5% -ен разтвор на киселина (сярна, солна, азотна или оцетна) за 30 секунди.
3) Лекарството се промива добре с течаща студена вода и се суши.
4) Dokrashivaetsya Leffler метиленово синьо в продължение на 1 - 2 минути.
5) лекарството е струя се промива с вода, суши се и mikroskopiruyut. На син фон цитоплазма видим люляк - червени спори.
Този метод позволява откриване на спорите не само по време на образуването им в клетката, но също така и след образува спор разлята от унищожаване на микробна клетка.
разтвор Получаване Ziehl е:
10 мл. наситен разтвор алкохолно фуксин се разтваря в 100 мл 5% карболовата киселина.
зърна откриване volutin
Зърна volutin (замяна вещество полифосфат характер) могат да бъдат открити в клетки на много микроорганизми.
В бактерии и актиномицети volutin гранули разположени в цитоплазмата на дрожди и гъби - в вакуоли. Обикновено зърно volutin повече в младите клетки.
В небоядисана държавата volutin голям зърно се открояват от останалата част на плазмата повече svetoprelomlyaemostyu. Въпреки това, наличието на по-добро зърно volutin определя в оцветени препарати. За откриване volutin зърна, използвани за синьо оцветяване метил Leffler. Зърно volutin докато боядисани в синьо - цветът лилаво и цитоплазмата - в синьо.
Диференциални volutin оцветители зърна може да бъде постигнато чрез различни методи, включително оцветяване метода от Neisseria (Neisser). Neisser разработи и предложи да се идентифицират зърна volutin клетки дифтерия бактерии.
Когато се оцветяват по метода на Neisseria зърно volutin оцветени в синьо или тъмно - кафяв, протоплазма и - светлина - кафяв.
Volutin зърна могат да бъдат определени чрез метода на оцветяване Omelyansky. За тази цел Фиксираната намазка изсипва разтвор Ziehl за 30 секунди. След това боята се изпразва, лекарството се промива с вода и се обезцветява в продължение на 30 - 40 секунди с 1% разтвор на сярна киселина. Киселината се изпразни, лекарството се промива с вода и метил dokrashivayut синьо при разреждане 1:40 в продължение на 30 секунди. След промиване с вода получаването се суши и mikroskopiruyut.
Зърно volutin с този метод на цвят са боядисани в лилаво - червено и се вижда ясно на фона на синьо цитоплазма.
Когато оцветени по метода на подготовка грам зърно volutin в тона и интензивността на цветовете не са диференцирани от цитоплазмата, така метод Оцветяването по Грам за откриване на зърна volutin използва няма смисъл.
Някои микроорганизми заместващи вещества се натрупват под формата на гранули въглехидрати. Те могат да бъдат идентифицирани чрез третиране на клетките с разтвор на Lugol. Гранули krahmalopodobnyh вещества са оцветени в синьо, и гранулите glikogenopodobnyh полизахариди - червеникаво - кафяв цвят.
Micropreparations оцветяване на изпитвания материал
Слайдовете кръв оцветени с Романовски - Giemsa, магента, синьо или други метил анилинови бои.
Да спазва вегетативни етапи на чревни протозои са паразити интравитална оцветяване разтвор на Lugol, слаби разтвори на основни багрила (еозин, метил синьо и т.н.) при разреждане 1: 1000 и дори 1: 10000 по-подробни паразити проучване течни препарати фиксирани скоби (течна Schaudinn метил или етил алкохол), и се оцветяват с хематоксилин, метил синьо, фуксин, боя Романовски.
Микроскопско изследване на тампони урина, гръбначно-мозъчна течност, слюнка фиксирана препарати оцветени от Грам Романовски - Giemsa, метил синьо
Фиксирани слайдове на съдържание гнойни язви punctates buboes, лимфни възли, в зависимост от предназначението патоген Gram оцветени от буря, Романовски - Giemsa, посребряваше от Морозов.