Употреба: биотехнологии, храни и медицинската промишленост. изобретения протеин фракция втечняване яйце добавя 0.6- 1.4% разтвор на амоняк. Изолиране на лизозим се извършва чрез сорбция, извършва последователно преминава през сорбент silohrom марка SG-CX, започвайки предварително уравновесена с разтворител, който се използва като разтвор 0.6-1.4% -ен амоняк. протеинов разтвор и отново с изходен разтворител, последвано от елуиране със смес от лизозим 0.8-2,0% разтвор на оцетна киселина с 0.1-0.3 М натриев хлорид и след това разтвор на лизозим се концентрира за кухи влакна. 70 L,
(5!) 5 ° С 12 N 9/36. 23 J 1/08
Българското патентно комитет и tovariymznakam (21) 5000076/13 (22) 01.08.91 (46) 15,02.93. Бул. Н. 6 (71) Централен институт по Advanced Medical (72) V.N.Morozov, S.A.Samarin. E.G.Scherbakova, T.P.Zhuravleva, S.S.Zhukov, V.P.Chuprunov и А V.Kuchmy (73) Централен институт на Advanced Medical (56) М френски патент 256 972, т. С 12 N
9/36, публикуван. 1985 година.
М 7123438, CI. С 12 N 9/36, 1977 (54) МЕТОД ЗА ПРОИЗВОДСТВО НА ЛИЗОЗИМЕН
Изобретението се отнася до биотехнологията, храна и медицинската промишленост. по-специално за технология за получаване на лизозим от пилешки яйчен протеин. Лизозим се използва като лекарство, като хранителна добавка в млечната промишленост за обогатяване на защитни фактори за деца и клинични хранителни продукти.
Целта на изобретението е да се опрости процеса.
"CX-наричат", предварително уравновесена изходен разтворител, който се използва като D-ти 0.6-1.4 амоняк разтвор, разтвор на протеин и да започне отново разтворителя, последвано PLN yutsiey лизозим смес 0,8-2,07--ен разтвор на оцетна киселина с 0.1-0.3 М натриев хлорид и след това разтвор на лизозим се концентрира за кухи влакна. последвано от смес на лизозим zlyutsiey
0,8-2,0% воден разтвор на оцетна киселина
0.1-0.3 М натриев хлорид и след това разтвор на лизозим се подлага на концентриране и диафилтруване кухи влакна.
За първи път за изолиране на лизозим като сорбент се използва макропорестта гел silohrom марка "CX-SG"
ГОСТ 10973 или 38,101832-80 ТУ, който е слаб катионобменен базирани bursilikatnogo стъкло. Silohrom "CX3B" има висока пропускливост, не се уплътнява, не се деформира, което не подлежи на биологично разграждане, разрешили проблема със своята химическа стерилизация, L в момента има вътрешен производител производство на сорбент в необходимите количества в предложения tehnichesko.l решение работил условия сорбция лизозим; и върху сорбента използва .em 0,6-1.4 - Foot!
Протеини яйца втечнени използвайки хомогенизатор поток и се смесва с воден разтвор на амоняк от 0.6-1.4 в съотношение 1: 5. Хит жълтък протеин е неприемливо, дори и в малки количества, тъй като това води до влошаване на сорбента и намаляване на лизозим дейност. Полученият протеинов разтвор се филтрува през груб филтър (или марля. Сгънат на няколко слоя).
За да се изолира лизозим използва проба промишлено хроматографска колона; диаметър 150 mm и височина 720 mm, с капацитет от 12,8 литра. За да се подава в колона с помощта на перисталтична помпа разтвори NSR-15 М, проследяване добив фракция протеин се извършва с помощта на UV поток детектор "Volcord $ П" LKB произведен (Швеция), довежда се до дължината на пропуснатата светлина от 280 пМ. Колона, запълнена със сорбент silohrom "CX-3B", разтворителят началната баланс. който се използва като 0.6-1.4 разтвор на амоняк. След това, полученият протеинов разтвор се изпомпва в колоната.
След като клетките се извършват на перална сорбент със същия разтворител до всички започвайки с пикова мощност nesorbirovavshihsya протеини ( "пробив"). Елуиране с лизозим сорбент смес чрез сила колона 0,8-2.0
55 разтвор на оцетна киселина 0,1-0.3 М натриев хлорид, до пълното елюиране на лизозим. Фракциите на елуата, съдържащ лизозим, се събират, диафилтруване и се концентрират в същото време на кухи влакна ултрафилтрация единица
OLA-6, стерилно опаковани във флакони и се суши чрез замразяване. Целият цикъл на производство на лизозим продължава 3-4 дни, хроматографията се 10-14 часа.
Пример 1. Протеин 1000 яйца (30 L) се втечнени от gomogenieatora поток и се смесва с 0,6 воден разтвор на амоняк в съотношение 1: 5. Полученият протеинов разтвор се филтрува през груб филтър (или тензух, сгъната в няколко слоя). За да се изолира лизозим използва промишлено хроматографска колона с диаметър проба
150 mm, височина 720 mm, с капацитет от 12,8 литра. За да се подава в колона с помощта на перисталтична помпа разтвори NSR-15
M1 добив проследяване на протеин фракция произведени с помощта на UV детектор поток "Volcord SLL" произведен от LKB (Швеция). настроен на дължината на пропуснатата светлина от 280 пМ. Колоната се запълва с сорбент silohrom "CX-ДГ" и се уравновесява с изходен разтворител, който се използва като 0 6 NY разтвор на амоняк. Полученият протеинов разтвор се изпомпва в колоната. След lieotsima на сорбента се извършва като се излиза измиване разтворител към Общият добив от колона nesorbirovavshihsya протеини ( "пробив"). Елуирането се изпомпва през колона на лизозимния разтвор на 0,8 с оцетна киселина 0.1 М натриев хлорид до пълното елюиране на лизозим.
Фракциите на елуата, съдържащ лизозим, се събират, диафилтруване и се концентрират в същото време на кухи влакна ултрафилтрация единица OLA-6, стерилно опаковани в лиофилизирана и vlakony. Хомогенността на получения продукт се потвърждава чрез електрофореза в градиент полиакриламидни гелове. Лизозим активност EDlmg 9601060, което съответства на Ту
Tehred M.Morgental Corrector S.Lisina
НПО "Търси Rospatent
113035, София, F-35, Raushskaya МаВ. 4/5
Производство и издателство "патент, Ужгород, Gagarina 101 създава филтрува протеин изходен разтворител, който се използва като 1,4 разтвор на амоняк, колона сорбент silohrom" CX-замърсители "в резултат протеинов разтвор се инжектира. След промиване се извършва започвайки със същия разтворител до общият добив от колона nesorbirovavshihsya протеини ( "пробив"). Zlyutsiyu lieotsima с сорбента се извършва със смес от 2 (, Nogo разтвор на оцетна киселина с 0,3 М NaCl, лизозим събира елуат се концентрира и се обезсолява на етажа olokonnoy ултрафилтрация. дозира и лиофилизиран. Добивът е 65,3 грама на лизозим продукт се хомогенизира при определяне elektroforeeom полиакриламиден гел.
Активност lieotsima Edlmg 1000, което съответства на Ту 64-3-208-85 loroSposob лизозим за производство на лизозим разреждане на фракция протеин, съдържащ яйцата, третиране с алкален разтвор и извличане на получения разтвор на лизозим IE. на листни въшки и Н и т shiysya с това, че, с цел да се опрости технологичният процес, като алкалният разтвор се използва 0.6-1.4 NY разтвор на амоняк, и селекция се извършва чрез сорбция извършва. шок. получаване цикъл взе 4 дни, с хроматография € "14 часа.
По този начин, предложеният метод има следните предимства:
5 1. опростява процеса: да се намали времето на желания избор на продукти от 12 до 3-4 дни, изключва многостепенен, 10 за установяване на необходимостта от по-големи резервоари, позволява избор на лизозим без охлаждане.
2 "се използва за изолиране на продукта на вътрешния tselevo15 евтин сорбента 3. Намаляване на работната зона.
4. Позволява умен и шевове в размер на сол в отпадъчните води.
20 Сериен преминаване през silohrom SG-CX, предварително уравновесена начална rastvroritelem, който се използва като 0.6-1.4 разтвор на амоняк и разтворът на протеин е отново startovgo разтворител, последвано от елуиране със смес от 0,8-2,0 лизозим-Nogo разтвор на оцетна киселина до 0.1-0.3 М натриев хлорид, след което lieotsima разтвор се подлага на концентриране и диафилтруване кухи влакна.
Свързани статии