Изолиране на чисти култури от фитопатогенни бактерии от една клетка е много важно в изследването на формирането на колония, репродуктивни процеси, променливост и наследственост ефект върху бактериални патогени на растения от различни дезинфектанти, антибиотици и др Много методи за изолиране на единични клетки, предложени в литературата. Тук представяме описание на някои от тях.

Фракционен метод Пастьор
Този метод се използва сега много рядко и е от голямо историческо значение. Тя се състои в следното.
Малко количество от материала въвежда в редица флакони с стерилна хранителна среда или друга течност хранителна среда по такъв начин, че в последната тръба остава приблизително една клетка, при което се получава възпроизвеждане на чиста култура. Това се осъществява, както следва: спад на изпитвания материал, съдържащ условно 1000000 бактериални клетки се поставят в епруветка с 10 мл среда и се смесва добре. След това тръбата от 1 мл се прехвърля в друг (както в 10 мл среда) и отново внимателно се разклаща. Този процес последователност се повтаря пет или шест пъти. Последният тръба получи бактериална клетка, от която след това се развива чиста култура.

метод на разреждане, последвано от покритие върху твърда хранителна среда
От 1 мл бактериална суспензия, съдържаща 30 милиона микробни органи (за фотометрично метод), при спазване на правилата на стерилност произвеждат десетократно разреждане до 10в-8.
Така, в предпоследния тръба (разреждане 10в-7) трябва да бъде около три микробни клетки. След това, 1 мл от всяка от последните три разреждания се пренасят с помощта на шпатула и се разстилат равномерно върху блюдо на Петри на сухи картофени агарни плочи или друг носител твърдо вещество растеж. Плаките се поставят в инкубатор в продължение на един ден, след това се съхранява при стайна температура. На третия ден, единични колонии, отглеждани в чаши. При използване на тази техника, можем да предположим, че всяка колония се превърна от една клетка.
Освен това пресяване повърхност разреден изходен материал се използва в скрининг метод дълбочина твърда хранителна среда от P. Koch. Методът има съществени недостатъци - колония в средна дебелина растат бавно, техните морфологични характеристики не са типични, премахване на тези колонии трудно. Поради това е необходимо да се използват методи, които създават условия за изолиране на чиста култура от известен бактериални клетки. Това се прави под контрола на микроскоп с помощта микроманипулационните устройства за.

метод microcolonies
В сравнение с метода на plansifters бактериални microcolonies метод суспензия има предимството, че ако се прилага е директна селекция на единична клетъчна култура.
Методът се състои в това, че от микробни клетки за отглеждане, получаване на силно разредена суспензия в 0.5% агар или желатин, който се прилага на тънък слой върху повърхността на стерилен стъкло. Стъкло закрепен върху влажна камера под формата на стъкло слайд или вдлъбнатини vyshlifovannymi пръстен.
Лекарството с маркирана под микроскоп за индивидуални клетки се поставят в инкубатор до образуване на колония. След това с помощта на пипета или бримкови колонии се прехвърлят в отделни епруветки.
метод microcolonies дава възможност да се използва голямо увеличение на микроскопа и microcolonies сравнително надеждно предпазва от изсъхване и замърсяване отвън.
Технически, методът е достъпен и надежден, тъй като трансферът е извършен в хранителна среда на клетки, отгледани от отделни колонии и суров изключени и ненадеждни трансфер от ръцете на отделни малки клетки.

Метод агар блокове Erskova
Микробният суспензия се прилага за слой Agapa 2- 3 mm в дебелина, поставени на стерилен стъкло, и след това се разделят агар квадратите се прехвърлят в стерилни стъклени покривни напречно облицована, която е затворена от повърхността със стерилна покривно стъкло. Под микроскоп, като се използва суха или система за потапяне и матирано осветление, маркирайте тези квадратчета агар, които съдържат една клетка. Стъклата се поставят в инкубатор. Парчетата агар с колонии отгледани в него, като се използва платина игла се пренася в хранителната среда.
Основният недостатък на този метод - възможността от замърсяване на околния въздух.

Hort Метод с перфорирани плочи
На повърхността на стерилен предметно стъкло тънък слой от агар се излива, която след втвърдяване се прилага силно разредена бактериална суспензия. Наложи глоба в агарова плоча и целулоид перфориране на горната част е покрита със стерилна покритие приплъзване. Под микроскоп, обърнете внимание на клетката, съдържаща една клетка. Колонии, отглеждани в тези клетки носят "харпун" в хранителна среда.

метод "Меркурий щит" Топли, Бернар и Уилсън
Този метод е както следва: малко количество шест-часова култура на бактерия за изпитване се въвежда в желатин 10% в пептонова вода и се държи при 37 ° С за 2 часа. Малка капка желатин линия прилага стерилен предметно стъкло и се покрива със стерилна покривно от кварц или selinita. Течността трябва да бъде разпределен тънко и не съдържа въздушни мехурчета. Под микроскоп, са единични клетки. На кварцово стъкло на клетката с тънък желязо покритие живак капчиците на. След това получаване се облъчва с ултравиолетова светлина кварцова лампа (за 1 мин на разстояние от 7,5 см от лампите). В резултат на всички бактерии изключение защитено живак умират. След един ден на преживелите клетки развиват колонии, които бяха пасажирани в течна среда.