За получаване на чисти култури от плесени - факултативни сапрофити и факултативни паразити, поддържане на тяхната жизнеспособност за по-нататъшно проучване се използват различни среди. Тези носители се диференцират в твърди и течни с известни и неизвестни химичен състав на естествени и изкуствено получено. Изборът на един вид или друг хранителен субстрат, зависи от нуждите и целите на гъбична организъм текущото проучване. Например, в изследване на растителна имунитет за оценка резистентност гостоприемник растение да патоген токсични вещества и неговото влияние върху растежа на патогенна форма разпределение е необходимо да се получи богата спорообразуването.
Специфична среда са взети в хода на експерименталната работа. Гъби засети едновременно на различни медии в центъра на блюдото на Петри (трикратно) и се държи при оптимални температури за неговото развитие. Наблюдението се извършва в продължение на 12-15 дни за растежа и развитието на гъбичката (енергия на растежа, и започва характер на спори, мицел и дебелина Т. П.) да избере най-подходящата среда. Когато се използва стандартен синтетични носители състава може да се променя чрез добавяне или премахване на различни химични компоненти.
Често е необходимо да се проучи околната среда, които АП ще гъбички израства и се развива по-добре, отколкото в природата. Това може да бъде постигнато, поради факта, че след стерилизация измежду конкурентни микроорганизми са унищожени, както и неговите съставни вещества преминават през дълбоки биохимични промени, които допринасят за по-добро усвояване на някои гъби. Обикновено това агарна среда с отвара или инфузия (екстракти) на приемащата растителни или детелина стъбла. Така, етап 1 литър вода, 100 г пресни или 50 г изсушени гъбички органи хранене растения. Масата се раздробява, нагрява едно часа понижено първоначалния обем на течността, се филтрува и след това се добавя 2-2.5% агар-агар разтворено и се стерилизира (МК Khokhryakov, 1969).
II Miikevichem за отглеждане на гъби, паразити на дървесни растения, се използват носители естествена култура, получени съгласно рецептата. Ситно нарязани нишки определени греди (200 г) се излива с вода (1 L) и се оставя да престои 12 часа при 80 ° С, след това се филтрува и се прибавя инфузионен агар (2.5%). След това средата се стерилизира чрез преминаващ пара два часа в Koch апарат. За специални изследвания са получени от различни сортове екстракти, които са подредени в концентрация (1% суха основа) чрез серийно разреждане. Може би използването на такива естествени среди и по-висока концентрация.
За някои таксономични групи от патогенни гъбички по много изследователи са избрани природен хранителен субстрат и дефинирана среда с известни химически състав. Така че, емпирично го установи, че видовете от род Fusarium расте добре върху варени зърна ориз; гъби от рода Piricularia развиват обилно спорообразуването върху агарна среда с отвара от пшеница или кореноплодни моркови. Съставите на твърди хранителни среди за някои видове и групи от гъбички са показани в Таблица 20.
Подготовка среда, е необходимо да се има предвид следните факти:
- гъби обикновено растат по-добре в среда, богата на въглехидрати, но тях растат в тези среди, за дълъг период от време може да намали sporulyatssho;
- гъбички най-предпочитаните слабо кисела реакция (рН 6.0-6.5) и бактериите - неутрален (рН 7.0) или слабо алкална;
- въглехидрати и протеини в киселинни и алкални разтвори се разрушават чрез загряване, така че те трябва да бъдат стерилизирани умерено или добавени поотделно;
- Агар се разтваря в половината от нормална вода за 1-2 часа и хранителни вещества - в останалата вода, след което компонентите се смесват;
- агар не се втвърди в много кисела или базична среда;
- пептон може да се изключи най-вече от страна на медиите, предназначени за гъбички;
- преварена дестилирана вода е за предпочитане, тъй като първата съдържа полезни микроелементи; гъби от рода Phytophthora добре да се използва дестилирана вода;
- за течности, които включват растителен материал от тях направи предварително качулка при ниска (картофен агар) или висока (картофено декстрозен агар) температури.
В някои случаи (в проучване д. Токсичните секрети патогени, ензими и т.н.) се използват течни носители култура. Например, токсичните ефекти на секрети Deuterophomatracheiphila изследвани в среда получава, накисване namelchennyh филизи на растението гостоприемник (200 г издънки на 100 cm 3 вода). За ustilaginales препоръчва носители със следния състав: 0,03 грама К2 S04; 0.01 грама от NH4 NO3; 10,0 грама декстроза (или малтоза); 0.01 грама CaCl2; 0.01 грама Mga (Р04) 2 -4N2 0 и 100 cm 3 вода.
За провеждане на различни изследвания в биологията гъбички и устойчивостта на растенията става необходимо да се дългосрочно съхранение на чисти култури. Въпреки това, след съхраняването на редица патогенни гъби променят морфологични и културни характеристики, а понякога губи своите патогенни свойства. Ето защо, преди провеждането на опити с гъби, предприети след дълготрайно съхранение като чиста култура, е необходимо да се възстанови тяхната патогенност разходи. проходи през растението гостоприемник.
Съставът на хранителни среди за отглеждане на фитопатогенни гъби
Името на хранителната среда
Компонент Състав на 1 литър вода, г
Един общ метод за поддържане на чисти култури от гъбички служи техните периодични субкултури на прясна хранителна среда. Повечето култури се преминават през 2-3 пъти в годината. Чрез субкултивиране прехвърлят предимно спори, докато форми -mitsely спорогенните колонии от зоната на ръба.
Субкултурите се направи в два екземпляра, а депозитът на 3 екземпляра оставени на всеки гъбична култура, преброяване и да се засадят отново на предходния период. Един от най-новите пътища се използват само за бъдещото презасаждане, а другият - за скрининг по време на експерименталната работа.
За дългосрочно съхранение на гъби е най-добре да се използва лошо захари нишесте и целулоза среда. Няколко polusaprofitnyh гъби са добре запазени в стерилна естествен материал (например, гъбички от рода Cytospora PAS клонове гостоприемник растение); с най-подходящата температура 4-5 ° С Дълбоко охлаждане (приблизително около - 20 ° С) задоволително запазва жизнеспособността гъбички много дълъг период от време.
Поддържане на култура на гъбички може също под минерално масло, след лиофилизация (изсушаване чрез замразяване при понижено налягане) и под течен азот в ампули. Ако гъбата се държат напълно преработени, те ще бъдат жизнеспособни 10 години или повече. Въпреки това, тези методи изискват обемисти и скъпо оборудване.
При нормални обстоятелства, събиране на гъби са най-добре пазената в широки тръби наклонена среда, памук-запушени. Въпреки това, човек трябва да се пази от щети на реколтата, акари (типове Tyroglyphus Tarsonemus и доставка), особено на юг и лятото в умерен климат. След пробив в епруветката, колби и Петрита те се хранят с културите на бактериите заразяват и замърсяват.
Има много начини да се справят с тези акари. Но преди всичко, че е необходимо да се съобразят с обща хигиена, да се вземат мерки, за да се гарантира, че лабораторията не летят насекоми, да бъдат внимателни, когато работите с органичен материал и почвата. Всички нови материали за допускане подлежи на контрол. Ако е възможно, да има отделни помещения за чисти и мръсни материал.
Достатъчно наситени, щепсели памук обикновено са непроницаеми за акари, доставката на културата на въздуха не е нарушен. За по-голяма гаранция на корк може да бъде обработен отрови вредно въздействие само върху акари. Също така се препоръчва да се използва филтърна хартия. За тази цел, след оклузия ръб .vatnoy тръба се задейства в пламъка на горелката и покрит с лепкав топло желатин с меден сулфат (меден сулфат - 20% желатин - 20% вода - 60%). След това, това покритие е фиксиран върху края на тръбата за цигарена хартия. След сушене на излишък хартията изгаря. Такава хартия с много фини пори предотвратява проникването на акари, предоставяне на достъп на въздух. По същия начин е възможно запушване на колбата, но гумена тръба се отстранява и хартия тъкан преди употреба стерилизира.
Всички колби също полезни, чаши и тръби с Замърсеният материал да се затварят при получаване на хартия.
Всички култури трябва да бъдат номерирани и записани на специални карти, които записват номера и името на културата, къде и как се разпределят, датата на разпределение, метода за разпределение, името на медии, прилагани в пасажи, наблюдения на растежа на патогена в чиста култура и обозначени със функции.
Свързани статии