Изобретението се отнася до хидроксипролин богати на гликопротеини, които могат да бъдат получени от растителни източници, както и да им козметична и фармацевтична употреба.

Известно е, че някои гликопротеини от животински произход, като колаген и протеогликани показват благоприятен ефект върху кожата, когато се прилага локално като такива или когато са включени в подходящи форми.

Колаген, който е гликопротеин, богата на пролин и хидроксипролин, е особено използва като такъв или в комбинация с други полипептидни бази в лечението на бръчки и други неестетични дефекти, свързани с лошо хидратация на кожата и еластичност. Въпреки това, животински колаген има ограничения в използването му, поради риск от заразяване с вируси и токсини. Въпреки, че съединенията от растителен произход не включват такъв риск, досега използването им в козметични продукти е доста ограничено: например, козметични формулировки са известни, които съдържат сурови екстракти от такива растения като Aloe или дори цялата почва растителни продукти като авокадо.

Известни растителни гликопротеини наречени estensinami които са получени от растителни клетки в етапа на пролиферация и имат структура, подобна на животински колаген. В ЕР-А-05334078 описва козметични използването на extensines със средно молекулно тегло по-голямо от 100,000 далтона. Въпреки това, методите на екстракция extensines описани досега, които включват извличането на растителни материали от различен произход чрез водни солеви разтвори, последвано от пречистване със силни киселини, като трихлороцетна киселина, не позволяват да се получат подходящи продукти за козметика, поради проблеми, свързани с разтворимостта, повторяемост устойчивост и техните химико-физични характеристики.

Сега е установено, че е възможно да се получи хидроксипролин богати гликопротеини, структурно подобни на описаните по-горе extensines но с по-ниска мол. тегло и по-висока разтворимост във водни разтвори киселина, по метода, включващ култивиране ин витро клетки избран растения и екстракция киселина-алкохолни разтвори на клетки, растящи в подходяща среда.

Гликопротеините получени съгласно изобретението, имат хидратиращи, образуващ филм, тонизиращо и насърчаване на цикатризация свойства на по-високо ниво от тези на колаген. Гликопротеините от това изобретение могат да се използват в козметични или дерматологични състави за лечение на суха кожа, псориазис, ихтиоза, пърхот, кератоза, бръчки, акне, екзема, възпалителни дерматози, стареене на кожата и всички други приложения, за които очакваното използване на животно колаген.

Водни разтвори на гликопротеините от изобретението са стабилни без полимеризация на гликопротеините, водещи до образуването на неразтворими продукти. Освен това, вискозитетът на тези решения е особено висока и не зависи от концентрациите; 0.1% концентрация изненадващо имат същото филмообразуващ и хидратиране на силата, които имат разтвори на 1% колаген или 5% растително албумин.

тъкан калуси растенията след стерилизация и по избор добавяне на антибактериални средства обикновено се използва за инокулум на подходящи носители течна култура, както е описано в гореспоменатия инструкцията Добс и Робъртс. Особено подходяща среда за това изобретение е Murashige и Skoog сряда. Прибавянето на специфични добавки като пролин, редуциращи агенти, етилен или съединения, способни да освобождават етилен като Етефон или L- aminotsiklopropankarbonovaya киселина, може да бъде подходящ за увеличаване на производителността или производство на желаните гликопротеини.

Предпочитано използване на нафтилоцетна киселина, като ауксини, 6- (, диметиламино) пурин като цитокинин, витамини и 3% захароза като източник на въглерод.

В зависимост от избрания материал може да бъде изгодно да се прибави витамин С за предотвратяване на придобиване на крайния кафяв продукт.

Времето за ферментация може да варира от 3 до 12 дни и за предпочитане е между 5-6 дни. Веднага след завършване на ферментационната среда на културата се центрофугира и клетъчната маса се екстрахира с алкохол, за предпочитане етанол, в присъствието на разредени минерални киселини, за предпочитане солна или сярна киселина. Тази процедура инактивира някои ензими, които могат да застрашат стабилността на гликопротеините от изобретението, по-специално, полифенолоксидаза tirozinoksidazu и които подпомагат полимеризацията на гликопротеини с последващо образуване на неразтворими продукти.

екстракцията на алкохол в присъствие на минерални киселини позволява пълно извличане на основните гликопротеини и в крайна сметка много селективен. В допълнение етанол могат да се използват и други смесващи се с вода алкохоли, като метанол или изопропанол. Получените хидроалкохолни екстракти се неутрализират и след това се концентрира и се загрява до температура от 70-100 ° С, за предпочитане около 80 ° С, до пълното утаяване на денатурирани протеини. След това суспензията се избистря чрез концентриране и течността се подлага на фракционна ултрафилтрация за отстраняване на високо и ниско молекулно тегло вещества. Ултрафилтрация се извършва, използвайки полисулфон мембрана с прекъсване молекулно тегло 10,000-40,000 далтона, като Centricon R или Romicon R. влакна, които могат да бъдат кухи или, алтернативно, навити. Полученият продукт се филтрува electrodialysed за отстраняване на нежелани вещества като соли и захари ниско молекулно тегло. След филтруване и диализа, полученият разтвор може да се използва като такъв в козметични или фармацевтични препарати или може да се концентрира до малък обем и след това се лиофилизира или фино смлян.

Аминокиселинен - ​​Площ на пика,% Asp - Glu 4,399 - 4,328 Hyp - 17,505 Ser - Gly 7,065 - 6,056 Hys - Arq 1.782 - 2.471
Thr - 4739
Pro - 10036
Ala - 8,2
Tyr - 2388
Val - 6162
Met - 1154
Ил - 2479
Leu - 5525
Phe - 1862
Lys - 14254
Тези данни се отнасят до процента на общия брой аминокиселини, присъстващи в сместа гликопротеин. Захарите в сместа са арабиноза и галактоза. Съотношението на аминокиселини на захари е равен на средно от 2: 1 за различни продукти.

Както бе споменато по-горе, продуктите на настоящото изобретение могат да се използват във фармацевтичната област и в областта на козметиката. За фармацевтичен продукт, може да бъде включен в гелове или мехлеми или прилага за насищане марля медицинска подготовка за специално лечение на изгаряния или рани. В този случай продуктът обикновено се подлага на стерилизация или стерилно филтриране и лиофилизиране.

Козметичните и дерматологични препарати от изобретението могат да бъдат получени съгласно конвенционални методи. Примери на форми за приложение включват водни спрейове, лосиони, разтвори, емулсии, гелове, мехлеми и кремове.

Козметичните и дерматологични препарати от изобретението могат да съдържат хидроксипролин богати на гликопротеини в количество от около 0.01 до около 50 тегл.%, За предпочитане от 0,05 до 5% тегл., Както и конвенционални ексципиенти. С тази висока стабилност на гликопротеините от това изобретение, фармацевтични и козметични препарати, съдържащи повече от 50% от разтворими хидроксипролин богати гликопротеини могат да бъдат получени.

Гликопротеините от изобретението могат да бъдат добавени към фармацевтични и козметични препарати като такива или могат да бъдат микрокапсулирани, така че да се осигури дългосрочно действие хидратиране. Микрокапсулите могат да бъдат или хидрофилни или липофилни. Съставите от настоящото изобретение могат да включват други активни съставки като допълваща или полезна активност за желаните цели.

По-нататък изобретението се илюстрира със следните примери.

ПРИМЕР 1
Получаване на калуса и течна култура от Гинко Билоба за производство на гликопротеини
Се получава експлант на млади листа на Гинко Билоба оставя от промиване в 0.1% Tween 80 (Tween 80 R). остриета листа, нарязани на части около 0.5 cm и предварително стерилизирани в продължение на 1 минута с 75% етанол. След стерилизация се допълва с 2% разтвор на натриев хипохлорит и тройна промиване на експланта в стерилна вода. Получените експлантите се прехвърлят в блюдо на Петри в Murashige и Skoog среда, съдържаща 3% захароза, с добавянето на Lynsmeyer и Skoog витамини и хормони, такива като 2,4-дихлорфеноксиоцетна киселина и нафтилоцетна киселина. Продуктите се инкубират на тъмно при 23 ° С в продължение на 20 дни. В края на този период, инертни калуси се получават които растат лесно и развиват непрекъснато редове по време на субкултивиране в същите условия, при които те могат да бъдат използвани за размножаване в течна среда. Calli използва за innokulirovaniya Ерленмайерови колби, съдържащи 200 мл Murashige и Skoog среда, допълнена с naftipuksusnoy киселина и 6- (, диметиламино) пурин, Lynsmeyer и Skoog витамини и 3% захароза като източник на въглерод. Колбите се инкубират при разбъркване в непрекъсната светлина в продължение на 4 дни, след което клетъчната биомаса се събират за добив на гликопротеини.

Пример 2
Получаване на гликопротеини от Гинко билоба клетки
5 литра култура, получен съгласно пример 1, се центрофугират при ниска скорост и събраните клетки (1.5 кг свежо тегло) се екстрахират с 1.5 литра 70% етанол, съдържащ 1% сярна киселина. Екстракцията се повтаря два пъти по този начин количествено екстрахиране основните гликопротеини. След неутрализация, екстрактите се филтруват за отстраняване на мътност и се концентрират под вакуум при 50 ° С до пълното отстраняване на етанол. Водният концентрат се нагрява при 85 ° С в продължение на 30 минути и се центрофугира отново за отстраняване на утайката, която се изхвърля. Полученият бистър разтвор се ултрафилтриран използвайки Centricon R мембрана с прекъсване 40,000 Dalton лимит за изключване на веществата с високи молекулни тегла.

ПРИМЕР 4
Козметичният състав
100 г масло-във-вода емулсия съдържа:
Разтвор на Пример 2 или 3 - 10.0
Ацетилираният ланолин алкохол PEG-10 - 2.0
Цетил стеарилов алкохол, - 1,5
Цетилпалмитат - 2.0
Стеаринова киселина - 7,0
Oktiloktanoat - 7,5
калиев цетил фосфат - 0,5
Консерванти - Ако е необходимо,
Вкус - Ако е необходимо,
Пречистената вода - до 100 колкото е необходимо
Пример 5
Козметичният състав
100 г масло-във-вода емулсия съдържа:
Разтвор на Пример 2 или 3 - 10.0
Tsetilstearilglyukozid - 5.0
Масло от жожоба - 10.0
Изопропил - 8,0
Диметикон - 0.5
Антиоксидант - Ако е необходимо,
Консерванти - Ако е необходимо,
Вкус - Ако е необходимо,
Пречистена вода - в количество, необходимо за 100
Допълнителни експериментални данни.

ПРИМЕР 6
Козметичният състав
Разтвор във вода, г:
Разтвор на сместа от пример 2 или 3 - 2.00
Имидазолидинил карбамид - 0.30
Метилпарабен - 0.20
Хидроксиетил - 2,00
Пример 7
Козметичният състав
Гел, г:
Разтвор на сместа от пример 2 или 3 - 1.00
Пропиленгликол, диазолидинил карбамид, метилпарабен, пропилпарабен - 1.00
Пречистената вода - колкото е необходимо до 100 MLT

2. Козметичен препарат за хидратация на кожата, съдържащ като активен агент смес от гликопротеини, съгласно претенция 1.

3. Козметичен препарат съгласно претенция 2, под формата на воден спрей, лосион, разтвор, емулсия, гел, мехлем, крем.