Един от най-важните етапи на програмата за ин витро е ембриона етап. Ето как ще се изпълнява качеството на яйцата процедура за оценка се извършва оплождането и следващите култивиране зиготи и ембриони зависи от успешното завършване на ин витро оплождане.

Ембрионално етап на програмата за ин витро не продължава повече от 6-7 дни. Традиционно, той може да бъде разделена на няколко етапа, които са описани по-долу.

Ден "-1" - подготвителния етап

На този етап, ембриолога подготвя всички необходими материали за пункция процедура фоликул и торене. На този ден, всички маркирани и номерирани плочи, петрита са пуснати на отоплението (да бъде стриктно спазване на режим температура) и ekvilibrovku (регулиране на рН до стойности от 7.35-7.45) цялата среда, необходима за промиване на фоликули и овоцити и лечение оплождане сперма.

Ден "0" - пункция на фоликулите (аспирация яйце) и оплождане

По време на фоликул пункция, яйцеклетки присъстват като ootsitarno-кумулус комплекс (РСС). В фоликуларен течност се получава по време на трансвагинален проверка пункция embriologist под стереомикроскоп (или просто око) наличието на РСС, които се появяват като синкав мукозните съсиреци размер от 5-10 мм. Бързо избран PCC поставя в средата на културата, където специалист предварително оценява техния брой, качество и зрялост. Важно е да се разбере, че морфологията на комплекса не винаги е възможно да се даде вярна оценка на степента на зрялост и състоянието на яйцето.

Ние прободен яйцето трябва да приключи първото мейотично деление, след което се отделя на първата полярна тялото. Вторият раздел обикновено е най-метафаза. Хромозоми образуват серия, като по този начин създаване на метафазата плоча, разположена непосредствено над полярен тялото. В яйцето се извършва мейоза блок, който е в състояние да се премахне само нахалник сперма през черупката.

Фотографиите показани по-долу, са примери на зрели и незрели ооцити. Човешки яйцеклетка с "идеални" параметри има светлина, цитоплазма е умерено гранули, малки perivitelline пространство непокътнати първия полярен тяло и кръгови безцветно бистър зона. Въпреки това, повече от 50% от всички яйцеклетки, получени в tsiklahstimulyatsii суперовулацията има един или повече морфологични промени!

Според съвременните концепции, качеството на яйцеклетката е от решаващо значение за развитието на ембриона и клинична бременност!

Сперматозоидите, преди да проникне в яйцеклетката, в резултат на все по оплождане, ще трябва да преодолеят редица препятствия. Първо, кумулус (Sumulus) - прониква по-дълбоко във вътрешността него, сперма увеличава скоростта си, което показва фаза хиперактивност. Второ, бистър зона (зона пелуцида) - тук сперматозоидите се свързва към рецептора.

След това, реакционната смес, в която цитоплазмената мембрана на яйцеклетката и сперматозоидите са комбинирани мембрана. Съдържанието на акрозома на сперма изхвърлени се свързва с една зона ясен и сперма прониква в черупката на яйцето, без да губи своята активност.

На място, което се намира между черупката и бистър зона, спермата се присъединява към неговите рецептори рецептори, които са разположени върху черупката на яйцето. Тя допринася за кортикална реакция, която причинява необратими процеси прозрачната обвивка на яйцеклетката, което го прави недостъпни за други проникването на сперматозоидите.

По същия начин, оплождане се извършва по естествен цикъл на техниката за ин витро (IVF). При тежки мъжки стерилитет, както и малко количество / получен чрез извличане трансвагинален яйцеклетка, процедура интрацитоплазмено прехвърлянето на сперматозоидите директно в цитоплазмата на яйцеклетката (Intra-цитоплазмена инжектиране на сперматозоиди, съкращение ICSI или ICSI). Първо микроинжектиране на сперматозоид в яйцеклетката проведе Янагимачи Uehara и Япония през 1976 година. ICSI е най-честата техника mikromanipulyatsionnoy изкуственото осеменяване, което в момента се използва широко като човешко технологии за асистирана репродукция. процедура ICSI предхожда яйцеклетка денудация (ензимни препарати за лечение хиалуронидаза, denyudirovanie (отстраняване на кълбести клетки)), обработка на сперма (прост центрофугиране, центрофугиране в плътностен градиент, плуват нагоре).

Ден "1" - оценка на оплождане:

След 16-18 часа след ICSI, или 18-20 часа след IVF, изчислено е, наличност и качествени характеристики на торене зиготи. Наличието в яйчен 2 pronuclear (PN) и две полярни органи (РВ), показващи нормалното развитие на процеса на оплождане. Клетъчно ядро ​​- ядрото на полови клетки (сперматозоиди и яйце), извършващи част от генетичния материал на всеки родител.

На този етап е важно да се отхвърлят необичайно оплодени ембриони: monoploidy (1 проядрата) triploids (3) и полиплоидност (4 или повече).

Зиготи с 3 ядра (про-ядра) могат да възникнат в резултат:

1. Торенето на овоцити 2 или повече сперматозоиди (обикновено два сперматозоида оплодената яйцеклетка незадоволително качество)
2. Торенето на незрялата яйцеклетка ненормално сперматозоидите с двоен набор хромозоми (всички човешки клетки имат 46 хромозоми - диплоидни). Зряла яйцеклетка и сперма са хаплоиден набор от 23. образуването на сперматозоиди с двоен набор от хромозоми (46) се среща в разстройства на съзряване на гамети.
3. Неразпределени яйцеклетка втория полярен тяло. Процесът на зреенето на яйцеклетките - хромозомна трансформация води до образуването на яйцеклетка с хаплоиден набор от хромозоми. Хаплоидни, постигнати благодарение на селекция от 2 полярни тела. Първо, образувана в яйцето готова за оплождане, а втората може да се види след оплождането, т.е. обикновено се наблюдава в две полярни тела.

Полиплоидност са резултат от лошо качество на овоцити оплождане множествена сперматозоиди или от комбинация от посочените по-горе фактори.

Ден "2" - началото на потушаването

На втория ден след сливането на генетичен материал на сперматозоидите и яйце се раздробява - разделяне на клетки на 2 или 4. Клетките фрагментиране наричат ​​ембрионални бластомери.

На този етап, както и в деня на "3", еднородността се оценява бластомери реда на тяхната ориентация една спрямо друга и, ако е възможно, на броя на ядрата в тях (обикновено в 1).

Ден "3" - раздробяване

След още един ден ембриони, по правило се състои от 4, 6 или 8-бластомери. Генетични програма ембриона се движат по сцената 4-клетъчна, в края на втория - началото на третия ден на развитие. До този момент на ембриона се развива единствено от "запаси", натрупани в яйцеклетката по време на растеж и развитие в яйчника. Тя работи на третия ден на генетичната програма на сперматозоидите, и ако "генетичен книга", в която кодирана програма на нормалното развитие на ембриона, съдържа грешки - някои "правописни грешки" или мутации, ембриона спира да се развива. Това е естествен процес на подбор на генетично нормални ембриони. Поради това е в стъпка 4-8 бластомер до 20% от ембрионите се спря в развитието (така наречената "единица развитие").

Причините за лошо качество на ембрионите могат да бъдат с лошо качество на спермата или лошо качество на яйцето. Смята се, че ако на ембриона расте лошо първоначално, а след това, че проблемът е в яйцето, а ако развитието на първите два дни върви добре, а след това започват проблемите, случаят в лошо качество на спермата.

Ден "4" - морула

На 4-тия ден на развитие на човешкия ембрион има елемент, обикновено от 10-16 клетки, контактите клетка-клетка постепенно уплътняват и заглажда повърхността на ембриони (процес уплътняване) - започва морула етап (от латински морули -. Mulberry). По този етап ин виво (при майката), ембрионът се движи от маточната тръба в матката. До края на развитие на 4 дни в кухина постепенно морула - започва кавитация процес.

М 4 (А): напълно уплътнена ембрион. Клетъчни мембрани са ясно видими, но различими ядро.

М 3 (В): уплътнява повече от 75% от бластомерите. Ембриони запазва формата на сферични и гладка повърхност.

2 М (С): частичен уплътняване (около 50% от бластомери), нарушена морфология на ембриона.

М 1 (D): уплътняване на по-малко от 50% от бластомерите. Различими неядрени фрагменти и nekompaktizovavshiesya бластомери.

Пример запис - (М3) - морула уплътняване с повече от 75% от бластомерите.

Ден "5" - бластоциста

Тъй като кухина в морула достига повече от 50% от обема си, ембрионът се нарича бластоциста.

Обикновено образуването на бластоциста, може да бъде в края на 4 до средата на 6-ия ден на развитие, често това се случва на 5-ти ден. Бластоциста се състои от две клетъчни популации - трофобластна (trophectoderm (ТЕ), еднослоен епител околната кухината) и вътрешната клетъчна маса (ICM (ICM), гъстите клетките слепват). Трофобласта отговорен за имплантиране - въвеждане на ембриона в маточния епител (ендометриум). трофобластни клетки водят до всички по-нататъшни екстраембрионалната мембрани на развитието на плода и всички тъкани и органи на детето ще бъдат образувани от вътрешната клетъчна маса. По-голямата кухина на бластоциста и по-добре развитите вътрешната клетъчна маса и трофобласт - по-голям потенциал за имплантиране на ембриона. При достигане на бластоцист кухина на значителен размер, е разреден с разтягане зона пелуцида (ZP) е счупен и започва процеса на люпене (люк) ембриони на лъскава обвивка. Едва след като този процес е в състояние да се имплантира бластоцист (приложен) в ендометриума на матката. Имплантирането обикновено се случва на ден 5-7 от развитието на ембриона.

1 степен - началото на бластоцист, на бластоцист кухина по-малко от половината от обема на ембриона.

2 степен - повече от половината от кухината на обема на бластоцист ембрион.

3 степен - пълен бластоцист. Кухината е напълно заема обема на ембриона.

4 степен - разширената бластоциста. Кухината на бластоциста става все повече и започва да тънък ZP.

5 степен - trophectoderm nichinaet проникне в ZP.

6 степен - излюпени бластоцист, който напусна ZP.

Вътреклетъчно маса (ICM)

А - плътно опаковани с голям брой клетки.

Б - свободна група среден брой на клетките.

С - малък брой клетки

И - много клетки, които формират trophectoderm.

Б - няколко клетки.

С - малко на брой големи клетки.

Пример записи - (4аа) - разширен бластоцист VCR - плътно опаковани с голям брой клетки, образувайки много trophectoderm клетки.

спомагателни люпене

Въпреки факта, че репродуктивната медицина значително "пристъпи напред" през последните години, не всички случаи на лечение на стерилитет при първия опит завършва с настъпването на дългоочакваното бременността. За да се подобри ефективността на процедурите, към днешна дата, ние сме разработили редица специфични техники, които увеличават шансовете за имплантация на ембриона и по-нататъшното успешно развитие на бременността. Една от тези техники е асистирано излюпване (от английски на излюпят -. «Hatch от яйца").

Human плода в ранните етапи на своето развитие, заобиколени от блестящ прозрачен гликопротеин плик (латинско наименование «zonae pellucidae»), изпълнява ролята на защитна обвивка, която осигурява кортикална реакция ембриона селективна доставка на хранителни вещества и позволява да го предпазите от механични повреди. В процеса на клетъчно делене под влиянието на специални физически механизми и ензими, тя става по-тънка и в определено време (обикновено 5-7 часа делене) е счупени и "фишове", която позволява на ембрион от него и успешно имплантирани във вътрешната лигавицата на матката - ендометриума.

Въпреки това, по различни причини, този процес както ин виво, така и по отношение на ин витро оплождането се провежда правилно, не винаги е, че предотвратява по-нататъшното бременност. И това е такъв проблем по време на ин витро оплождане специалисти решен чрез асистирано - изкуствен нарези раздел лъскава обвивка на ембриона в лабораторията. Това увеличава вероятността от имплантацията на ембриона, и по-нататъшното напредване на бременността, при условие, правилната подготовка на ендометриума да приеме оплодената яйцеклетка.

Към днешна дата, има няколко метода за люпене, всяка от които има свои собствени характеристики:

• Механично люпене - механични въздействия върху прозрачен кожата на ембрион и се нарича частичен разрез. Специално микроигла лъскава обвивка пробита два пъти при определен ъгъл, като се образува тесен процеп, през който бластоциста може да оттегли лъскава обвивка бързо.
• Химическа люпене - специален ефект върху кожата корозивни химически разтвор (разтвор на Tyrode кисела), който микроинструменти прилагат в малката си площ. Обвивката се формира малък диаметър на отвора от 20 ± 7 цт, след което разтворът се отстранява, и ембрионът се промива няколко пъти, за да се избегнат вредните ефекти на агресивни вещества в своите клетки.
• Люпене с лазерна светлина - се извършва с тънък лазерен лъч, който чрез оптични лещи чрез безконтактното жлеба на корпуса (посредством чрез нараняване или повече от местната изтъняване). Тази техника е неточна, безопасно и ефективно, най-оптималния нея е използването на инфрачервени лъчи диаметър от 1480 пМ.
• метод Piezo - извършва с пиезоелектричен микроманипулаторът с висока честота microvibration, оставяйки конични вдлъбнатините на ограничена част на корпуса, като по този начин допринася за неговата изтъняване.

Въпреки факта, че помощният излюпването на много години, считани за рутинна процедура, е препоръчително да не се използва във всички случаи на чл програми. В някои случаи, при излюпване е особено важно, а в други тя не засяга честотата на бременност.

Специалисти инсталирани няколко възможни индикации за тази манипулация в IVF:

• възрастови жени над 38 години
• пушене
• няколко предишни неуспешни опита ин витро
• лоши морфологични параметри на ембриони
• сгъсти черупка на ембриона и неговите други аномалии
• високи нива на фоликулостимулиращ хормон в кръвта
• ембриотрансфер след криоконсервация

В тези случаи подпомага техника люпене могат да бъдат най-ефективни.