Що се отнася до варианти вярно хроматография, е полезно да се въведе понятието "мобилен" и "неподвижно" фаза. Това се отнася за движението на фракционирани молекули през колоната. Подвижна фаза, разбира се, да съдържа молекули извън гранулите. Те се движат по течението на елюент. Стационарна фаза - молекули вътре в гранулите. Такова отделяне е извършено, и филтриране на гел. Все още има в този смисъл молекули са тези, които поради тяхното разтваряне в стационарна водна среда пълнене на гранулите. Разбира се, в тази среда, те направиха брауново движение, но това не е да ги изнесат от високоговорителите. С материал се гранули, ако те влизат в реакция и след това механично - натъкват на полимерни влакна, образувайки гранули.
В случай на йонообменна хроматография, обратно, неподвижната фаза главно включва молекули специфичен начин свързани с материал пелети ( "сорбиран" върху него). Порьозността на последните в този случай, избран така, че фракционирани молекули може почти свободно проникват в гранули, запълване на целия вътрешен обем.
Самото име на йонообменна хроматография показва, че свързването на молекули с гранулите да бъдат йонни. Това се определя от Кулон сили на привличане между йони на обратен знак, прикрепени към влакна и гранули молекули съществуващите на повърхността. Думата "фиксирана" и "съществуващ" Предлагам пъти и фиксирани ситуацията завинаги. Междувременно, гъвкавостта и ефективността на метода на йонообменна хроматография се основава само на възможността за контролиране на положението, и с това връзката на захранващия фракционира молекулно вещество с матрични гранули - сорбция характер на тези молекули.
Вместо постоянно йон на нишките на матрицата и на повърхността на макромолекулата (например, протеин) са разположени "йонна група", които, в зависимост от условията в околната водна среда (рН, присъствие на соли) може да се прояви или като отворен носещи електрически заряд йони, или неутрализира поради конвергенция от тях носещи противоположен заряд йони, такива като Na + и С1, а понякога и поради свързване или дисоциация на протони Н +.
На повърхността на нейоногенен групи протеини странични клонове, завършващи с аминокиселини, такива като лизин или аргинин и аспарагинова и глутаминова киселина. протон дисоциация в първия случай и втората асоциация неутрализира тези групи. И двете от тези процеси зависи от концентрацията на протоните в околната водна среда, т.е.. Е. Стойността рН (или в алкална или кисела област). Вместо химични модификации, които са и двете явления, неутрализиране на йонните групи зареждане може да възникне поради адаптиране на противоположно зареден йон, подходящо под действието на силата на Кулон срещу йонна група от околната среда. Ковалентното химична връзка се образува. Скрининг йон в този случай се нарича "неутрализиращи".
Йонни групи, способни да покажат положителен заряд, по-нататък "анионни обменители" - те са по някакъв начин, подобен на анода в електрическата верига. Група отваря своя отрицателен заряд, съответно, по-нататък "катионни обменители." За да промените хроматографски гранули нишки избран практика малък брой йонни групи от различни "сили". Най-често използвани за "анионни обменители" (хроматографска матрица лагер анион) са: диетилен Noetus - съкращение DEAE и ди-2-етил-oksipropilaminoetil съкращението QAE. Отбележете, че първата от тези групи може да бъде относително лесно химически неутрализира в алкална среда, поради загубата на протон. Второ - носи положителен заряд при всяко рН на околната среда и адаптирането може да бъде неутрализиран само отрицателно зареден противойон. В съответствие с това отличие анионни обменители на базата на DEAE по-нататък "слаб", и въз основа на топлообменници QAE - "силен".
По същия начин, в случай на отрицателни йонни групи "катионни обменители" са "слаб" - те са карбоксиметилови групи и "силен", които са модифицирани с сулфопропилови групи. Съкращения на тези групи, съответно, SM и SP. Силни катионни обменители запазват своята отрицателен заряд през целия работен диапазон на биологични стойности (PNZ - 11) и могат да бъдат скринирани само от положителни противойони.
По отношение на матриците, носители, описани модификация (в случая на фракциониране на биополимери), вече е известно да ни пелетите на базата на полизахариди: Sephadex химически омрежена агароза и целулоза. Техните търговски имена присъстват и името на основния материал и кратко посочване на йонни групи. Например: .. "DEAE-Sephadex», «QAE-целулоза", "СМ-Сефадекс", "SP-Sepharose CL» т.н. Всеки тип предлага няколко топлообменници различни размери на порите и гранули.
Матрицата за йонообменна хроматография при високо налягане (силикагел) оставя настрана. Pharmacia Company за системата бързо протеин хроматография разработен на базата изключително еднакъв размер гранули два вида силни йонообменници: анионобменен под търговското наименование "Mono Р" - активна група trimetilaminometil kationoobmenik и "Mono S» - sulfometil активна група.
Сега тя ще е от полза да си представим някои пространствени отношения. Ние ще се фокусира върху пречистването и фракциониране на протеините, както е - основната област на използване на йонообменна хроматография. Диаметрите на глобуларни протеини (за разлика от тяхната маса) не се различават значително. Например, една молекула на говежди серумен албумин (М = 69 000) е с диаметър от 70 А, и гама-глобулин молекула (М = 150 000) около 100 А. (С оглед на тези фигури I споменати полистирен-базирани матрица, тъй като те резолюция след това, се намира в диапазона 5-20 А)
Порьозността на матрици, използвани за фракциониране на протеините се намира в диапазона от 300-1000 А. В такива пори протеинови молекули могат да се движат свободно, както като топка за тенис, направен от телена мрежа с ребра пространствени клетки в 30-40 см.
Протеините на повърхността йонни групи могат да бъдат на една влизат аминокиселини (всички - слаб), раздалечени на разстояние от няколко десетки ангстрьома. Йонни групи в гранулите могат да бъдат разположени по-тясно защото свързване на ОН-групи може да се извърши във всяка единица глюкоза. Но това е безполезно, тъй като двете толкова близко разположени групите не може, поради техния размер комуникират едновременно две белтъчни молекули, и нерентабилни, като изпълнен с твърде силно свързване на една молекула в няколко точки. Практиката разработен за средното разстояние между йонни групи на един размер матрица в 10--30 А.
Свързани статии